什么是單克隆抗體介紹(2)
四、產(chǎn)品特點(diǎn)：
高靈敏度、高特異性、結(jié)果容易判定。當(dāng)然您如果覺得很多試劑自己可以準(zhǔn)備想省一筆費(fèi)用，那您可以登陸網(wǎng)站選擇我們?yōu)槟鷾?zhǔn)備的簡裝抗體鑒定產(chǎn)品C030215。當(dāng)然您也可以下次把標(biāo)本交給我們來做并且不會增加太多費(fèi)用!!
五、保存條件：
2-8℃避光保存效期一年。不正確存放或過于頻繁開啟使用有可能因此使效期縮短。
六、注意事項(xiàng)：
1、雖然本試劑盒過期后很久還有使用價(jià)值但還是請您在有效期內(nèi)使用。
2、在檢測腹水類單抗時(shí)要稀釋到1/5萬，雖然可以分辨但并不建議您這樣做。此類樣品成分十分復(fù)雜，有干擾結(jié)果的可能。在此種情況下您可以選擇本公司的C030215抗體鑒定試劑。它會給您帶來滿意的結(jié)果。
3、手洗板子時(shí)一定要把孔加滿，停留10秒然后棄盡，最后要拍干凈。特別是在酶標(biāo)二抗溫育后洗板時(shí)一定要把酶吸出而不是甩出，要吸凈。這個(gè)在手工洗板時(shí)對結(jié)果很重要。
4、一次沒用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。
5、拿放板子時(shí)不要?jiǎng)×叶秳?，以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果。
6、出現(xiàn)異常結(jié)果請隨時(shí)咨詢我們。
單克隆抗體的克隆化方法
經(jīng)過抗體測定的陽性孔，可以擴(kuò)大培養(yǎng)，進(jìn)行克隆，以得到單個(gè)細(xì)胞的后代分泌單克隆抗體?？寺〉臅r(shí)間一般說來越早越好。因?yàn)樵谶@個(gè)時(shí)期各種雜交瘤細(xì)胞同時(shí)旺盛生長，互相爭奪營養(yǎng)和空間，而產(chǎn)生指定抗體的細(xì)胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時(shí)間也不宜太早，太早細(xì)胞性狀不穩(wěn)定，數(shù)量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)過一段時(shí)期培養(yǎng)之后，也還會因?yàn)榧?xì)胞突變或特定染色體的丟失，使部分細(xì)胞喪失產(chǎn)生抗體的能力，所以需要再次或多次克隆化培養(yǎng)?？寺』螖?shù)的多少由分泌能力強(qiáng)弱和抗原的免疫性強(qiáng)弱而決定。一般說，免疫性強(qiáng)的抗原克隆次數(shù)可少一些，但至少要3～5次克隆才能穩(wěn)定。克隆化的方法很多，包括有限稀釋法、顯微操作法、軟瓊脂平板法及熒光激活分離法等。
(一)有限稀釋法
1.材料
(1)微量培養(yǎng)盤，盤內(nèi)各孔于克隆化前一天培養(yǎng)小鼠腹腔細(xì)胞(即飼養(yǎng)細(xì)胞)每孔2萬～4萬。
(2)HT培養(yǎng)基
2.操作方法
(1)取出抗體陽性孔細(xì)胞，用HT培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液。并取樣進(jìn)行臺盼蘭染色，計(jì)數(shù)。
(2)用HT培養(yǎng)液將細(xì)胞稀釋成200個(gè)/ml、40個(gè)/ml、20個(gè)/ml和的懸液。
(3)用吸管將細(xì)胞懸液分別種入微量培養(yǎng)盤，每孔0.05ml，細(xì)胞含量分別為10個(gè)/孔、2個(gè)/孔、1個(gè)/孔和0.5個(gè)/孔。
(4)5%CO2飽和濕度，37℃培養(yǎng)。
(5)每天用倒置顯微鏡觀察克隆生長情況，選擇只有一個(gè)集落生長的孔，棄掉兩個(gè)以上和沒有細(xì)胞生長的孔。
(6)克隆大量繁殖后，布滿孔底的1/3～1/2時(shí)，測培養(yǎng)液抗體。
(7)抗體陽性孔細(xì)胞，移到有飼養(yǎng)層的組織培養(yǎng)瓶中，并傳2～4代就可以脫離飼養(yǎng)細(xì)胞，建成克隆株。
(二)軟瓊脂克隆化
借助撒在軟瓊脂上單個(gè)細(xì)胞定位生長，而達(dá)到克隆化，具體操作如下：
1.配2.5%的瓊脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。
2.將117ml完全DMEM液和3ml10倍濃度的DMEM液混合，置45℃水浴預(yù)熱。
3.將瓊脂糖與DMEM液混合，即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液，并加75×108脾細(xì)胞。
4.每塊平皿加10ml，于室溫中凝固。
5.DMEM中的細(xì)胞與DMEM—瓊脂1:1混合，將細(xì)胞瓊脂混合物2ml鋪于凝固的平板上，使其全部覆蓋。
6.放入CO2箱飽和濕度，37℃培養(yǎng)10天。
7.用PBS配制0.6%瓊脂糖，于沸水浴溶解后，置45℃，在保溫情況下取一試管，迅速加入0.1ml25%羊紅血球，0.2ml豚鼠補(bǔ)體，2.7ml0.6%瓊脂糖。
8.用3ml瓊脂糖—羊紅血球混合液覆蓋克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。從克隆上部溶解羊紅血球的溶血范圍，可篩選抗羊紅血球Ig。
(三)顯微鏡操作法
在直徑6cm培養(yǎng)皿中，加入1ml1.0×108細(xì)胞懸液放置5%CO2飽和濕度，37℃溫箱中放置30min以上，倒置顯微鏡下，尋找那些與周圍相距甚遠(yuǎn)的單個(gè)細(xì)胞，將毛細(xì)管口(一頭有直角彎頭毛細(xì)管，一頭連接一尺長乳膠管，用口控制液體進(jìn)入)水平置放于液面上，左右微動，直到看見管口，對準(zhǔn)細(xì)胞，吸入毛細(xì)管，將管中細(xì)胞移到預(yù)先加有2.0×104~5.0×104飼養(yǎng)細(xì)胞96孔板內(nèi)，培養(yǎng)后，即可獲得單個(gè)細(xì)胞形成的克隆。
(四)熒光激活分離法
用一種熒光激活細(xì)胞分類器(FluoresceinActivafedCellSorter，F(xiàn)ACS)。其基本原理是：將細(xì)胞經(jīng)熒光抗體染色后，經(jīng)噴嘴形成單個(gè)細(xì)胞的線形液滴，在萊塞光激發(fā)下，熒光素發(fā)射熒光，此信號由光電倍增管接收，再結(jié)合細(xì)胞形態(tài)大小產(chǎn)生光散射信號，經(jīng)電腦處理，產(chǎn)生信號并與預(yù)定的信號對比，根據(jù)細(xì)胞熒光強(qiáng)度及細(xì)胞大小不同，將細(xì)胞分成不同級別，在電場中發(fā)生偏離，而分別收集于不同容器中。
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