什么是外周血_相關(guān)介紹
什么是外周血_相關(guān)介紹
正常人外周血中一般看不見(jiàn)幼稚的干細(xì)胞的,只存在有極少量的造血干細(xì)胞,那么你對(duì)外周血了解多少呢?以下是由學(xué)習(xí)啦小編整理關(guān)于什么是外周血的內(nèi)容,希望大家喜歡!
什么是外周血
外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,再?gòu)难褐刑崛》蛛x得到造血干細(xì)胞,我們把這樣得到的干細(xì)胞稱(chēng)為外周血干細(xì)胞 ,在二十一世紀(jì)初人類(lèi)開(kāi)始的生命方舟計(jì)劃中首次提出外周血這一新概念。
正常人外周血中一般看不見(jiàn)幼稚的干細(xì)胞的,只存在有極少量的造血干細(xì)胞,其含量為0.01%左右。如果幼稚細(xì)胞的比例大幅增加,有可能是類(lèi)白血病。正因?yàn)榇嬖?.01%的造血干細(xì)胞,可利用細(xì)胞分離的技術(shù)(血細(xì)胞自動(dòng)分離機(jī)),將外周血中含有造血干細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行分離保存,重復(fù)數(shù)次達(dá)一定細(xì)胞數(shù)量后,回輸給患者以之代替骨髓而進(jìn)行的干細(xì)胞移植,稱(chēng)為外周血干細(xì)胞移植。
培養(yǎng)基配制外周血
配制用水
培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn),水的電阻應(yīng)為200萬(wàn)歐姆,一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的
雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2~7.4,若pH值超
過(guò)7.6或遠(yuǎn)低于6.8,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。
血清
培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類(lèi)、時(shí)間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無(wú)血清培養(yǎng)基。
抗菌素
為防止培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的污染,可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)抗菌素,一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/
毫升,鏈霉素100微克/毫升。
植物血凝素(PHA)
非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細(xì)胞,但在離體培養(yǎng)過(guò)程中,在PHA的作用下,可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44—48小時(shí)和68—72小時(shí)。
PHA有粘多糖,蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA激活的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細(xì)胞均
被激活為止,但PHA濃度過(guò)高會(huì)引起凝集,一般采用4%濃度為好。
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