RNA干擾在哺乳細胞中的基因沉默效應(yīng)近年才發(fā)現(xiàn)，目前已變成基因功能研究中的一種工具。下面是小編精心推薦的一些rna干擾技術(shù)論文，希望你能有所感觸!

　　rna干擾技術(shù)論文篇一

　　RNA干擾治療新進展

　　【關(guān)鍵詞】 RNA;干擾治療

　　RNA干擾在哺乳細胞中的基因沉默效應(yīng)近年才發(fā)現(xiàn)，目前已變成基因功能研究中的一種工具[1]。基于RNA干擾的技術(shù)已成為現(xiàn)代藥物靶向性研究和有效性研究的基本工具。由于RNA可以模擬藥物的對抗效應(yīng)，siRNA自身能直接被開發(fā)成藥物用于治療人類疾病，只要選擇好疾病的靶向位點，就可繞過藥物開發(fā)的復(fù)雜和長期的過程，從而節(jié)省大量的經(jīng)費。因此，RNAi干擾的治療前景廣闊。

　　RNA干擾或RNAi基因沉默由siRNA介導(dǎo)，主要通過降解與其同源的mRNAs，而且這種效應(yīng)貫穿真核細胞始終。受益于RNAi生物技術(shù)的快速發(fā)展，現(xiàn)在已經(jīng)知道外源基因?qū)NAi導(dǎo)入哺乳動物細胞主要是利用miRNA進化保留途徑。在哺乳動物細胞內(nèi)，內(nèi)源性miRNA基因轉(zhuǎn)錄經(jīng)Drosha產(chǎn)生miRNA初體，在細胞核內(nèi)miRNA初體進一步形成miRNA前體，miRNA前體然后通過Exportin5形成成熟的miRNA，miRNA整合形成RISC復(fù)合物，通過抑制RNA補體翻譯或降解RNA補體來調(diào)節(jié)基因表達。miRNA有重要的生理作用，特別是在惡性腫瘤的早期發(fā)展中。

　　1 RNAi的藥物開發(fā)潛力

　　與傳統(tǒng)的小分子藥物和抗體想比較，RNAi治療有如下優(yōu)勢：(1)由于可以通過對靶基因序列合理的設(shè)計藥物，從靶標到藥物的過程大大縮短。(2)RNAi藥物的合成路線基本相同。(3)RNAi治療能夠鎖定任何基因，包括非藥物和非蛋白基因。(4)RNAi藥物具有高度特異性。(5)仔細選擇位點可避免發(fā)生靶向失活效應(yīng)。(6)任何有相同化學(xué)組分的RNAi藥物的藥代動力學(xué)相似。由于有以上優(yōu)點，已經(jīng)有很多生化公司開始制造RNAi藥物[2]。

　　2 RNAi治療存在的問題

　　盡管開發(fā)RNAi藥物的熱情高漲，也取得了一些進步，但廣泛使用RNAi藥物仍然有一些大的障礙需要克服。RNAi藥物跟其他核酸類藥物一樣，有藥代動力學(xué)差的缺點[3]。另外，RNAi基因治療和其他基因治療同樣存在著轉(zhuǎn)運的問題。

　　雖然siRNA在血漿中的穩(wěn)定性比單鏈RNA顯著提高，但是作為一種能全身實際應(yīng)用的藥物仍然太低了[4]。這主要是因為血漿中的核酸酶非常豐富，從而引起了RNA的降解。需要指出的是，如果沒有轉(zhuǎn)染載體的幫助，核酸是不能通過細胞膜進入細胞內(nèi)的，而這些轉(zhuǎn)染載體在體內(nèi)使用通常是有毒性的，因此這是細胞攝取的另一大障礙。最近，通過提高siRNA的穩(wěn)當性和增加細胞的攝取，在核酸化學(xué)和配方上取得的進步已經(jīng)改善了siRNA藥物的藥代動力學(xué)[5]。主要表現(xiàn)在以下幾方面：(1) siRNA分子的化學(xué)修飾增加了siRNA對核酸酶的抵抗力。幾種不同的siRNA修飾骨架增加了siRNA分子的穩(wěn)定性，而且在有些病例表現(xiàn)得更有效[6]。(2) 新的配方增加了siRNA在血漿中的穩(wěn)當性。(3) 新配方也增加了細胞的攝取siRNA能力。(4) 最近一種siRNA聯(lián)合抗體技術(shù)可以使siRNA藥物治療具有細胞特異性。(5) 仔細設(shè)計藥物使用方法可以達到理想的生化分布和治療效果。藥物使用方法基本上可分為兩大類：局部和全身用藥，在幾種動物模型上已成功使用局部給藥的方法。包括老年性斑點退變的眼內(nèi)給藥[7]，癌癥的腫瘤內(nèi)注射、哮喘的鼻內(nèi)給藥[8]，中樞神經(jīng)病變的腦內(nèi)給藥等。與局部給藥相比，全身給藥有血液中穩(wěn)定性差和生化分布差的缺點。目前靜脈應(yīng)用siRNA已成功的抑制了動物肝臟體內(nèi)的乙肝病毒的感染[9]。然而，目前尚不能接受這種方法在人體應(yīng)用時所帶來的風(fēng)險，仍然還需要進一步觀察。另外，由于miRNA通路和肝組織再生能力被干擾，腺病毒介導(dǎo)的RNAi干擾有嚴重的肝毒性。因此在全身應(yīng)用siRNA藥物時應(yīng)特別小心。當然，也有報道通過靜脈注射siRNA/shRNA，成功的使小鼠相應(yīng)基因沉默[10]。

　　3 siRNA治療的安全性

　　siRNA的高度特異性使得它有可能成為安全和特效的治療藥物，然而，它在安全性方面仍然存在很多問題。

　　3.1 雙鏈RNA對轉(zhuǎn)錄和翻譯的干擾效應(yīng)是非特異性的，因此引起了細胞的調(diào)亡。已經(jīng)有報道指出脂質(zhì)體和某些特定的siRNA序列一樣可以增加動物模型的干擾效應(yīng)[11]。siRNA最佳設(shè)計可以減少干擾反應(yīng)的誘導(dǎo)。

　　3.2 腺病毒載體介導(dǎo)的siRNA有可能產(chǎn)生與病毒有關(guān)的免疫反應(yīng)[12]。逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的siRNA可以在肝臟內(nèi)傳遞，但是這種病毒由于要與宿主染色體整合，其長期治療的安全性仍有待進一步觀察。

　　3.3 siRNA的失靶效應(yīng)現(xiàn)象已經(jīng)被廣泛接受，這也可能會產(chǎn)生安全性的問題[13]，因此在設(shè)計和篩選靶序列是應(yīng)特別小心。

　　3.4 由于siRNA介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)與miRNA誘導(dǎo)的基因失活有著共同的組分，在體內(nèi)高表達的外源性siRNA是否會干擾正常的細胞生理也是一個問題。

　　4 展望

　　RNAi技術(shù)在今天已成為一種基本的藥物開發(fā)工具，它使得藥物開發(fā)過程顯著簡化、加速了新藥的開發(fā)、而且使得新藥開發(fā)在治療上具有最佳性。目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于腫瘤、感染性疾病、與年齡相關(guān)的黃斑性視力退化的藥物研究，基于RNAi的藥物必將重新規(guī)劃藥物開發(fā)的未來。

　　【參考文獻】

　　[1] Anderson J. and Akkina R. (2005). HIV?1 resistance conferred by siRNAcosuppression of CXCR4 and CCR5 coreceptors by a bispecificlentiviral vector. AIDS Res. Ther. 2, 1.

　　[2] Bennasser Y., Le S.Y., Benkirane M. and Jeang K.T. (2005). Evidencethat HIV?1 encodes an siRNA and a suppressor of RNA silencing.Immunity 22, 607～619.

　　[3] Birmingham A., Anderson E.M., Reynolds A., Ilsley?Tyree D., Leake D.,Fedorov Y., Baskerville S., Maksimova E., Robinson K., Karpilow J.,Marshall W.S. and Khvorova A. (2006).

　　[4] 3' UTR seed matches, butnot ove

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