關于基因科技論文范文3000字

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　　關于基因科技論文范文3000字篇一

　　抑癌基因E

　　作者：吳靜，高明太，周永寧，韓彪，劉健，寇偉，姬瑞, 路紅

　　【關鍵詞】 食管腫瘤

　　Relationship between Ecadherin expression and clinicopathologic properties of esophageal carcinoma

　　【Abstract】 AIM: To explore the expression of Ecadherin(Ecad)in esophageal carcinoma and its relation to clinicopathological features and patients survival. METHODS: The expression of Ecad in esophageal carcinoma was detected by immunohistochemical technique and its relationship to clinicopathological features and patient's survival was analyzed. RESULTS: The expression of Ecad was significantly higher in esophageal carcinoma tissue than that in normal mucosa (34/67 vs 6/31, P<0.01). Ecad abnormal expression was significantly correlated with the tumor differentiation, depth of invasion, lymph node metastasis and survival in 67 cases of esophageal carcinoma(P<0.05) but its relationship to age and gender of patient, and the size, location and gross appearance of tumor was not found (P>0.05). CONCLUSION: The abnormal expression of Ecad in esophageal carcinoma may be associated with the carcinogenesis. Ecad can be used as a important marker for predicting the metastasis potential of esophageal carcinoma and the prognosis.

　　【Keywords】 cadherins; esophageal neoplasms; immunohistochemistry; neoplasms invasiveness; neoplasms metastasis

　　【摘要】 目的： 探討鈣黏蛋白(Ecad)在食管癌組織中的表達及其與臨床病理特征和患者生存期的關系. 方法 ： 應用 免疫組化SP法檢測67例食管癌組織中Ecad的表達，并 分析 其與食管癌臨床病理特征和淋巴結轉移及患者生存期的關系. 結果： 食管癌組織中Ecad的表達水平明顯高于正常組織(34/67 vs 6/31, P<0.01)，異常表達率為50.8%;食管癌Ecad表達與食管癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移及患者的生存期密切相關(P均<0.05)，而與患者的年齡、性別、腫瘤的大小、部位和形態(tài)無關(P>0.05). 結論： Ecad異常表達與食管癌的發(fā)生 發(fā)展 密切相關，是判斷食管癌侵襲轉移及預后的一個重要指標.

　　【關鍵詞】 鈣黏附糖蛋白類; 食管腫瘤; 免疫組織化學;腫瘤侵潤;腫瘤轉移

　　0引言

　　E鈣黏蛋白(Epithelialcadherin, Ecad)是一類介導細胞間緊密連接、維持細胞極性、保持組織結構完整的鈣依賴性跨膜糖蛋白[1]. 研究 表明，Ecad 表達下降可能 影響 細胞間的黏附，促使腫瘤的發(fā)生發(fā)展，并與患者的生存期有關. 食管癌是我國常見的消化道惡性腫瘤，居腫瘤死亡的第4位[2,3]，其侵襲轉移是食管癌患者死亡的首要原因. 我們采用SP免疫組化方法，對67例食管癌組織中Ecad的表達進行研究，分析其與臨床病理特征及患者生存期的關系，為臨床 治療 提供依據(jù).

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　蘭州大學第一 醫(yī)院 外科1998/2001行食管癌根治術后的標本67(男55，女12)例，年齡28～78(平均51.5)歲. 所有病例術前未經(jīng)任何抗腫瘤治療，均經(jīng)病理檢查證實為鱗癌，其中高分化7例，中分化25例，低分化33例，未分化2例. 有淋巴結轉移36例，無淋巴結轉移31例. 對67例患者進行3 a隨訪，其中回訪50例. 切除組織經(jīng)40 g/L福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)4 μm厚度切片，分別進行HE染色和Ecad免疫組織化學染色. 用PBS代替一抗作陰性對照，癌旁組織作為陽性內對照. 鼠抗人mAbEcad為美國Sigma公司產(chǎn)品;SP組化試劑盒購于福州邁新生物技術開發(fā)公司.

　　1.2方法

　　采用免疫組織化學SP方法檢測Ecad表達. 將組織展開平鋪在涂有多聚賴氨酸面的載玻片上，經(jīng)二甲苯和梯度乙醇脫蠟脫水后，浸泡在蒸餾水中待用;然后浸入0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH=6.0±0.2)，15 min，功率750 W中行抗原修復. 每張切片加入50 μL內源性過氧化物酶10 min，以阻斷內源性過氧化物酶的活性. 切片經(jīng)0.01 mol/L PBS緩沖液沖洗后，加入100 mol/L正常山羊非免疫血清孵育10 min，以減少非特異性著色. 切片加第一抗體(鼠抗人mAb Ecad)，于4℃中過夜，然后每5 min PBS緩沖液沖洗，3次;再加入第2抗體30 min. 每張切片加新鮮配制的3,3二氨基聯(lián)苯胺(DBA)溶液，顯微鏡下觀察3～10 min，以控制反應時間及著色程度. 自來水沖洗，蒸餾水漂洗，蘇木素復染. 染色評估分別由兩位病理醫(yī)生完成，一致性達90%以上. Ecad陽性以細胞膜呈棕褐色著色為主，將染色半定量計分為0～3分. 0分： 細胞膜、細胞質均未染色;1分： 細胞質染色為主;2分：細胞膜、漿混合染色;3分： 正常細胞呈細胞膜連續(xù)染色.

　　統(tǒng)計學處理： 采用SPSS 10.0分析軟件包行統(tǒng)計學處理. 應用χ2檢驗分析Ecad表達與臨床病理特征的關系;應用KaplanMEier曲線及Cox多元回歸模型來分析Ecad表達與生存期的關系. P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義.

　　2結果

　　2.1Ecad在食管癌中的表達所有正常食管黏膜組織及癌旁組織均保留細胞膜陽性染色(Fig 1A)，主要定位于黏膜上皮細胞膜，尤其是細胞細胞連接處，呈棕黃色的連續(xù)細胞膜染色. 本組67例食管癌組織中，根據(jù)染色評估記分： Ecad記取3分者33例，0～2分者34例. 在食管癌組織中Ecad表達下降，異常表達率為50.75%，明顯高于正常組織(34/67 vs 6/31, P<0.01).

　　2.2Ecad表達與食管癌臨床病理特征的關系Ecad在正常食管黏膜組織及癌旁組織呈高表達. Ecad低表達與細胞分化程度相關(Tab 1)，分化越差，Ecad表達下降發(fā)生率越高(P<0.05, Fig 1B, C);Ecad低表達亦與浸潤深度相關(P<0.01). 本組67例食管癌，淋巴結轉移率53.8%，有淋巴結轉移者Ecad異常表達率(72.2%)明顯高于無淋巴結轉移患者(25.8%)，兩組比較差異非常顯著(P<0.01). 而Ecad表達與患者的年齡、性別、腫瘤大小、部位及大體形態(tài)無關系(P>0.05). 表1Ecad表達與食管癌臨床病理特征的關系(略)

　　2.3Ecad表達與食管癌患者生存的關系本組67例食管癌根治術患者，最后獲得隨訪50例， 應用 KaplanMEier曲線 分析 顯示(Fig 2)： 本組50例患者平均生存期(26.4±2.2)mo;Ecad異常表達與生存期下降密切相關，Ecad異常表達患者平均生存時間(20.2±2.4)mo;正常表達則為(33.5±3.1)mo，兩者之間具有顯著性差異(P<0.05). Ecad正常表達組患者3 a生存率為39.1%，Ecad異常表達組患者3 a生存率為11.1%，Ecad正常表達組的3 a生存率明顯高于Ecad異常表達組的3 a生存率，兩組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，應用Cox多元回歸分析顯示Ecad在食管癌的異常表達中不能作為獨立的預后指標，不同于以往的 研究 [4].

　　3討論

　　Ecad是一類建立細胞間緊密連接、維持細胞極性、保持組織結構完整的鈣依賴性跨膜糖蛋白[1]，位于16號染色體長臂22.1區(qū)帶的基因編碼，其Mr為120 000，包括5個重復序列構成的細胞外區(qū)及通過α, β, γ連接素與細胞骨架連接的細胞外區(qū). Ecad基因已被公認為抑癌基因，已發(fā)現(xiàn)Ecad在多種惡性腫瘤中表達下調[5]. 研究顯示[5-7], Ecad在食管癌的異常表達率為18.2%～87.0%，Ecad表達下降或功能缺失使癌細胞與鄰近細胞間的黏附作用降低，導致腫瘤細胞的活動能力和活動范圍增加，從而增強癌細胞的轉移和浸潤能力. 我們采用免疫組化 方法 對67例食管癌組織進行檢測發(fā)現(xiàn)，Ecad異常表達率為50.8%. 結果顯示Ecad表達與食管癌細胞分化程度密切相關，低/未分化鱗癌的異常表達率顯著高于高/中分化鱗癌(P<0.05)，表明Ecad在細胞分化機制中可能發(fā)揮某種重要作用，可作為食管癌分化的指標. 侵襲和轉移是癌癥患者致死的首要原因. 大量的研究發(fā)現(xiàn)，Ecad黏附系統(tǒng)通過不同機制干擾腫瘤細胞，當Ecad表達下調或功能障礙，將使細胞失去黏附，從原發(fā)灶脫落分離，向局部淋巴結轉移或遠處轉移. 我們的研究顯示，Ecad的異常表達與浸潤深度、淋巴結轉移密切相關，說明Ecad介導的細胞間黏附功能下降可促進癌組織浸潤和轉移，與腫瘤具備侵襲性生長的特點有關，Ecad異常表達在浸潤性生長的腫瘤高于膨脹性生長的腫瘤. Sloan等[8]及Cheng等[9]亦報道Ecad低表達顯著地與食管癌浸潤、轉移有關. 這些研究證實Ecad的功能明顯 影響 細胞的生物學行為，并認為是判斷食管癌預后的一個重要指標. 其浸潤轉移的機制可能與其基因突變或缺失表達下降，以及轉錄和翻譯失常等機制導致Ecad的異常[10]，進而促進腫瘤細胞解離，提高其浸潤和轉移能力.

　　黏附功能下降是惡性腫瘤細胞發(fā)生轉移的關鍵步驟之一. 我們隨訪50例食管癌患者，并結合免疫組化研究表明：Ecad表達和(或)功能異常導致的黏附功能下降可促進腫瘤的浸潤和轉移，從而影響腫瘤患者的生存期，Ecad異常表達與生存期下降密切相關(P<0.01);Ecad表達異?；颊? a生存率明顯低于Ecad表達正常者(P<0.01). 我們的研究顯示，Ecad異常表達與腫瘤的分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移密切相關，提示Ecad在食管癌的侵襲轉移中起重要作用，其表達降低可以導致上皮細胞由正常向癌變轉化.

　　【 參考 文獻 】

　　[1] Cai J, Ikeguchi M, Tsujitani S, et al. Significant correlation between micrometastasis in the lymph nodes and reduced expression of Ecadherin in early gastric cancer [J]. Gastric Cancer, 2001; 4(2):66-74.

　　[2] 寇煒，吳靜，嚴祥. 食管癌中CD44V5基因產(chǎn)物的表達及臨床意義[J]. 第四軍醫(yī)大學學報, 2003;24(14)：1293-1294.

　　Kou W, Wu J, Yan X. Expression of CD44V5 in esophageal cancer tissues [J]. J Fourth Mil Med Univ, 2003; 24(14):1293-1294.

　　[3] 王波，徐德忠，張艷, 等. 食管癌高發(fā)區(qū)p53基因第五外顯子突變分析[J]. 第四軍醫(yī)大學學報, 2003; 24(14):1328-1330.

　　Wang B, Xu DZ, Zhang Y, et al. Analysis of p53 gene exon 5 mutations in esophageal cancer in highincidence area [J]. J Fourth Mil Med Univ, 2003; 24(14):1328-1330.

　　[4] Krishnadath KK, Tilanus HW, van BlankenstEIn M, et al. Reduced expression of the cadherincatenin complex in oesophageal adenocarcinoma correlates with poor prognosis [J]. J Pathol, 1997; 182(3): 331-338.

　　[5] Si HX, Tsao SW, Lam KY, et al. Ecadherin expression is commonly downregulated by CpG island hypermethylation in esophageal carcinoma cells [J]. Cancer Lett, 2001; 173 (1):71-80.

　　[6] Kang DE, Soriano S, Xia X, et al. Presenilin couples the paired phosphorylation of βcatenin independent of axin: Implications for βcatenin activation in tumorigenesis [J]. Cell, 2002; 110(6):751-762.

　　[7] ConacciSorrell M, Zhurinsky J, BenZeev A. The cadherincatenin adhesion system in signaling and cancer [J]. J Clin Invest, 2002; 109(8):987-991.

　　[8] Sloan EK, Anderson RL.Genes involved in breast cancer metastasis to bone [J]. Cell Mol Life Sci, 2002; 59 (9):1491-1502.

　　[9]Cheng CW, Wu PE, Yu JC, et al. Mechanisms of inactivation of Ecadherin in breast carcinoma: Modification of the twohit hypothesis of tumour suppressor gene [J]. Oncogene, 2001; 20 (29):3814-3823.

　　[10]吳靜，薛群基，劉維民，等. E鈣粘蛋白與食管癌侵襲轉移的關系[J]. 世界華人消化雜志, 2003; 11(10)：1618-1620.

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