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念珠菌顯色培養(yǎng)基的臨床應(yīng)用研究

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  【摘要】 評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室研制的顯色培養(yǎng)基對(duì)臨床念珠菌的檢驗(yàn)效果及其應(yīng)用價(jià)值。方法 用本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基與沙保羅瓊脂培養(yǎng)基對(duì)93株臨床分離株進(jìn)行篩選,并比較兩種培養(yǎng)基的分離效果。對(duì)在本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的菌株進(jìn)行初步鑒別,并與API鑒定結(jié)果做比較。結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基的選擇性明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的沙保羅瓊脂培養(yǎng)基,特異性與科瑪嘉的結(jié)果相一致。經(jīng)API 20C AUX對(duì)可疑菌株進(jìn)行鑒定,白色念珠菌符合率為95.2%,熱帶念珠菌的為100%,光滑念珠菌的為87.5%,克柔氏念珠菌的為100%,總符合率為94.6%。結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基具有特異性高、選擇性強(qiáng)的特點(diǎn),能快速、簡(jiǎn)便地初步鑒別臨床常見(jiàn)念珠菌,適合用于臨床樣本中念珠菌的檢測(cè)。

  【關(guān)鍵詞】 顯色培養(yǎng)基 念珠菌 臨床應(yīng)用

  念珠菌(Candida)是臨床標(biāo)本中最常見(jiàn)的真菌,該菌可引起皮膚粘膜淺層或全身系統(tǒng)性感染,而且引起的感染每年都有增多的趨勢(shì)。因而對(duì)念珠菌做出快速鑒定十分重要。如今對(duì)臨床菌種鑒定的要求越來(lái)越趨向于程序簡(jiǎn)單化,甚至能用一種鑒定方法鑒定出盡可能多的菌種。而念珠菌顯色培養(yǎng)基可從臨床標(biāo)本中分離和初步鑒別出白色念珠菌(candida albicans)、克柔氏念珠菌(C.tropicalis)、光滑念珠菌(C.glabrata)和熱帶念珠菌(C.krusei),且能夠縮短以上幾種菌的培養(yǎng)時(shí)間,同時(shí)對(duì)標(biāo)本中雜菌抑制作用上明顯優(yōu)于沙保瓊脂培養(yǎng)基[1]。為探討顯色法的實(shí)用價(jià)值,本實(shí)驗(yàn)室用研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基對(duì)93株臨床分離株進(jìn)行測(cè)試,并與沙保羅是瓊脂培養(yǎng)基和科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基比較,并用API 20C AUX對(duì)可疑分離株進(jìn)行鑒定,為念珠菌顯色培養(yǎng)基的應(yīng)用提供借鑒。

  1 材料和方法

  1.1材料

  1.1.1 樣本來(lái)源

  93株臨床分離株來(lái)自于廣州腫瘤醫(yī)院的樣本

  1.1.2 培養(yǎng)基及試劑

  念珠菌顯色培養(yǎng)基 本實(shí)驗(yàn)室研制

  科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基 法國(guó)科瑪嘉公司

  沙保羅瓊脂培養(yǎng)基 OXOID公司

  API 20 C AUX鑒定條、API 20 E鑒定條 法國(guó)生物梅里埃公司

  1.2 方法

  1.2.1 沙保羅瓊脂培養(yǎng)基、本實(shí)驗(yàn)室研制念珠菌顯色培養(yǎng)基及科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基均按說(shuō)明書配制。

  1.2.2 將分離菌株分別劃線接種到沙保羅瓊脂培養(yǎng)基和本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基上,30℃培養(yǎng)48 h后觀察菌落的生長(zhǎng)情況。

  1.2.3將在沙保羅瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng),而在本實(shí)驗(yàn)室顯色培養(yǎng)基受抑制的20株菌株進(jìn)行革蘭氏染色及用適宜的API鑒定條進(jìn)行鑒定。

  1.2.4 將顯色培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)的念珠菌疑似樣本,挑取單菌落分別劃線接種于本實(shí)驗(yàn)室研制的和科瑪嘉的顯色培養(yǎng)基中,30℃中培養(yǎng)48 h,觀察菌落特征。

  表1結(jié)果的判讀表

  Table 1 Interpretation table of results

  1.2.5 同時(shí)將顯色培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)的念珠菌稀釋成2麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?,按照API 20C AUX的說(shuō)明書進(jìn)行操作,30℃孵育48~72h讀取結(jié)果,用ATBCIRS軟件自動(dòng)處理編碼得出念珠菌菌名。

  2 結(jié)果

  2.1 顯色培養(yǎng)基的分離效果

  沙保羅瓊脂培養(yǎng)基及本實(shí)驗(yàn)室研制的顯色培養(yǎng)基分離效果如表2所示。在沙保羅瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng),而在本實(shí)驗(yàn)室顯色培養(yǎng)基受抑制的20株菌株經(jīng)過(guò)革蘭氏染色后發(fā)現(xiàn)均為革蘭氏陰性菌桿菌,選用API 20 E對(duì)其進(jìn)行鑒定,結(jié)果如表3所示,這些菌株均為腸桿菌科的細(xì)菌,而非念珠菌,在沙保羅瓊脂培養(yǎng)基上表現(xiàn)為假陽(yáng)性,而在本實(shí)驗(yàn)室研制的顯色培養(yǎng)基上得到了很好的抑制。表明顯色培養(yǎng)基的選擇性明顯優(yōu)于沙保羅瓊脂培養(yǎng)基。

  表2 兩種培養(yǎng)基分離效果比較

  Table 2 the separation of two media

  表3 20株菌的API鑒定結(jié)果

  2.2 顯色培養(yǎng)基的特異性及符合率試驗(yàn)

  本實(shí)驗(yàn)室研制的顯色培養(yǎng)基和科瑪嘉顯色培養(yǎng)基在初步鑒別念珠菌種上的效果相同,37株菌與API鑒定的總符合率能達(dá)到94.6%。經(jīng)顯色培養(yǎng)基初步鑒別為白色念珠菌的21株菌,除1株被API鑒定為葡萄牙念珠菌外,其余20株均被鑒定為白色念珠菌,符合率為95.2%;經(jīng)顯色培養(yǎng)基初步鑒別為為光滑念珠菌的8株菌,除1株被API鑒定為挪威念珠菌外,其余7株均被鑒定為光滑念珠菌,符合率為87.5%;而熱帶念珠菌和克柔氏念珠菌在顯色培養(yǎng)基上初步鑒別的結(jié)果與API鑒定符合率均達(dá)到100%。表明顯色培養(yǎng)基對(duì)念珠菌各種的初步鑒別的特異性很高。

  表4 三種方法結(jié)果比較

  Table 4 The Results of three methods

  3 討論

  對(duì)念珠菌建立起鑒別性顯色快速檢測(cè)技術(shù), 實(shí)現(xiàn)對(duì)致病菌的快速檢測(cè), 可以大大地降低工作量、節(jié)省人力和物力, 因而在臨床疾病診斷中對(duì)提高檢測(cè)樣本效率具有十分重要的意義。目前, 國(guó)內(nèi)外已有不少應(yīng)用顯色培養(yǎng)基進(jìn)行致病菌分離的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo) [2-4]。

  臨床上最常見(jiàn)的4種念珠菌白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌和克柔氏念珠菌占念珠菌總數(shù)的95.3%[5], 而深部真菌感染中念珠菌的比例高達(dá)87.5%~94.5%[6-7]。本實(shí)驗(yàn)室研制的顯色培養(yǎng)基鑒定的37 株念珠菌中白色念珠菌占20 株(54.1%),在念珠菌中所占比例最高,與國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道相似[8]。熱帶念珠菌6株(16.2%)、 光滑念珠菌7 株(18.9%)、克柔念珠菌2 株(5.4%)。四種念珠菌占鑒定總株數(shù)的94.6%。

  已有文獻(xiàn)指出,沙保羅培養(yǎng)基用于念珠菌菌檢測(cè)容易造成漏檢或誤檢[9]。本次研究發(fā)現(xiàn)有20株在念珠菌顯色培養(yǎng)基受抑制的菌株在沙保羅瓊脂培養(yǎng)基上有生長(zhǎng),經(jīng)過(guò)API鑒定都為腸桿菌科的菌株。沙保羅瓊脂培養(yǎng)基容易受到腸桿菌科的雜菌干擾造成假陽(yáng)性的現(xiàn)象與黃曉燕等[10]的研究結(jié)果相符。從比較的結(jié)果可以看出,念珠菌顯色培養(yǎng)基的選擇性明顯優(yōu)于沙保羅瓊脂培養(yǎng)基。

  念珠菌生長(zhǎng)較慢,傳統(tǒng)的鑒定方法比較繁瑣,需時(shí)較長(zhǎng)且準(zhǔn)確率不高,而采用API鑒定條等自動(dòng)或半自動(dòng)方法雖能將菌鑒定到種,但價(jià)格比較昂貴,不適合中小型醫(yī)院及檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的大量使用。而本實(shí)驗(yàn)室研制的念珠菌顯色培養(yǎng)基中含有多種酶底物,可分別與白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌的不同酶類作用,從而呈現(xiàn)不同的顏色反應(yīng),達(dá)到在分離菌株的同時(shí)還可以對(duì)以上4種菌進(jìn)行初步鑒別。與科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基的比對(duì)顯示兩者的效果相當(dāng),均優(yōu)于沙保羅瓊脂培養(yǎng)基(不能區(qū)分念珠菌的各個(gè)種)。另外,顯色培養(yǎng)基對(duì)念珠菌的初步鑒別需時(shí)約48h,而傳統(tǒng)分離鑒定方法需要3~5天出報(bào)告,因而顯色培養(yǎng)法能及時(shí)給臨床治療提供依據(jù),對(duì)由念珠菌感染引起的疾病治療具有重要意義,同時(shí)顯色培養(yǎng)法鑒別符合率高,大幅度減少后續(xù)鑒定工作,而且該培養(yǎng)基制備簡(jiǎn)單,使用方便,價(jià)格相對(duì)便宜,適合在基層單位推廣。

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