與醫(yī)學(xué)相關(guān)的論文的范文集錦
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馬錢子減毒增效研究進(jìn)度
馬錢子，又名番木鱉，是馬錢科植物馬錢Strychnos nux-vomica L. 的干燥成熟種子。關(guān)于馬錢子的最早藥用見于《本草綱目》，其言：傷寒熱病，咽喉痹痛，消痞塊。馬錢子味苦、性寒，有大毒，具有通絡(luò)止痛、散結(jié)消腫之效，主要用于跌打損傷、風(fēng)濕頑痹、麻木癱瘓、癰疽腫痛等?，F(xiàn)代研究表明馬錢子的主要有效成分為生物堿，含量約1.5%~5%，其中主要是士的寧(strychnine)，約占總生物堿的35%~50%，其次為馬錢子堿(brucine)，還含少量的異番木鱉堿、異馬錢子堿、番木鱉堿N- 氧化物、馬錢子堿N- 氧化物等。
1 馬錢子的毒理學(xué)特性
馬錢子有大毒，口服馬錢子生藥7 g可致死，中毒潛伏期30~180 min。目前大部分學(xué)者認(rèn)為主要毒性成分是士的寧和馬錢子堿。士的寧和馬錢子堿的半數(shù)致死量 LD50(小鼠)分別為 3.27、233 mgkg-1(灌胃)和 1.53、69 mgkg-1(腹腔注射)。士的寧最小致死量：成人口服0.03~0.1 g，小兒5 mg也可致死。當(dāng)馬錢子堿和士的寧達(dá)到中毒劑量時，會出現(xiàn)超抑制現(xiàn)象，脊髓反射性興奮明顯亢進(jìn)，橫紋肌、平滑肌和心肌張力增強(qiáng)，出現(xiàn)強(qiáng)制性痙攣，心律失常、竇性心動過速，感覺器官十分敏感，最后因過度興奮及缺氧而麻痹致死[3]。士的寧還能阻礙膽堿酯酶對乙酰膽堿的破壞，從而增強(qiáng)腸蠕動，導(dǎo)致腹痛腹瀉。馬錢子堿和士的寧極大劑量時均有箭毒樣作用。韓進(jìn)軍指出馬錢子會導(dǎo)致腎小管上皮因缺血、缺氧而壞死，造成急性腎功能衰竭和尿毒癥。
2 減毒增效方法
現(xiàn)代藥理研究證明，馬錢子堿的療效僅為士的寧的1/40，而毒性比士的寧大20 倍，炮制后馬錢子堿和士的寧醚鍵斷裂開環(huán)，毒性大而療效較低的馬錢子堿被大量破壞，而士的寧被部分破壞，轉(zhuǎn)化生成了馬錢子氮氧化物、士的寧氮氧化物(其毒性僅為馬錢子堿和士的寧1/5 和1/10)，以及少量異士的寧和異馬錢子堿，不僅減輕藥物毒性而且保留了藥理活性。為了保證馬錢子臨床應(yīng)用的安全有效，針對其關(guān)于其減毒增效主要集中在規(guī)范炮制、合理配伍、劑型改革等方面。筆者就此作出以下綜述。
2.1 炮制
馬錢子的炮制方法較多，如砂燙、油炸、甘草制、醋泡、醋炙、尿泡等，現(xiàn)代方法以砂燙法、油炸為主，另有烘焙法、爆壓法、微波法等。
2.1.1 砂燙法
溫度在240~260 ℃左右，炒至出現(xiàn)連續(xù)爆破聲，呈黃棕色并鼓起即可，該法直接、簡單、方便。砂燙法是2010 版藥典中規(guī)定的炮制方法，應(yīng)用最為廣泛。占永良研究了不同溫度下砂燙馬錢子中生物堿含量的變化，最終確定240 ℃，時間3 min 炮制工藝時士的寧含量變化不大，而主要毒性成分馬錢子堿下降較多。徐穎等采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選馬錢子的炮制工藝，結(jié)果表明選用中砂，砂料比7∶1，溫度(1905)℃，炒制4 min為佳。實(shí)驗(yàn)證明，砂燙過程中溫度高低、火力大小、加熱時間對士的寧含量影響較大，240 ℃ 3 min 1.84%、250℃ 3 min1.51%、260 ℃ 3 min 1.20%、270 ℃ 3 min 1.03%、270 ℃ 4 min 0.78%。溫度相差10 ℃或時間多1 min士的寧含量可減少20%~30%，可見炮制品含量不穩(wěn)定。另外炮制時常通過爆裂聲和豆香氣等判斷，對操作者經(jīng)驗(yàn)要求較高，勞動強(qiáng)度高，近年來有人研究了其他方法代替砂燙法。
2.1.2 油炸法
取市售麻油，倒入鐵鍋中加熱至 235 ℃左右(以 400 ℃的溫度計(jì)距鍋底3 mm處測定)，投入馬錢子炸至老黃色(約3 min)，取出，瀝盡油，晾干即得。蔣以號等測定了不同炮制品水煎出物中士的寧和馬錢子堿的含量，其中油炸品和砂燙品為高，油炸品最高，可能是由于油炸和砂燙過程中破壞了馬錢子種皮使其質(zhì)地疏松，使生物堿易于溶出。
2.1.3 烘烤法
烘烤法代替砂燙法炮制馬錢子，140~160 ℃間烘烤 60 min。龔飛鵬等測定了砂燙品和烘烤品中士的寧和馬錢子堿的含量，結(jié)果溫度為200 ℃，烘烤30 min 條件下，士的寧和馬錢子堿含量與砂燙品含量相當(dāng)。朱磊等采用正交試驗(yàn)方法考察烘焙溫度、時間進(jìn)行優(yōu)選，180 ℃、40 min條件下馬錢子堿、士的寧的含量最高，損失最少。屈艷格等優(yōu)選了烘烤法的條件加熱為215 ℃烘烤 15 min，通過指紋圖譜比較得知烘烤法與砂燙法炮制馬錢子得到的炮制品中化學(xué)成分及含量極其接近。與砂燙法相比，烘烤法受熱均勻，溫度易掌控，士的寧含量變化緩慢，使得炮制品質(zhì)量更加穩(wěn)定，且烘烤法勞動強(qiáng)度低，節(jié)約成本等優(yōu)勢對大、小生產(chǎn)規(guī)模均有很好適應(yīng)性，可以說烘烤法代替砂燙法具有一定可行性。
2.1.4 爆壓法
丁建江等對爆米花機(jī)進(jìn)行改裝，在壓力1.5個大氣壓，加熱約5 min后快速減壓爆出，與砂燙法進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，爆壓法炮制馬錢子士的寧的含量穩(wěn)定在1.40%~1.49%，平均值為1.44%0.05%，且低于砂燙法含量1.22%~2.17%，平均值1.85%0.63%，提高了馬錢子的臨床用藥安全性。瞿群威等[14] 通過正交設(shè)計(jì)對爆壓法炮制馬錢子的工藝進(jìn)行了優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)表明壓力152 kPa，加熱時間為5 min條件下，馬錢子炮制品的士的寧含量適宜。沈玉杰提取了馬錢子生品、爆壓品、砂燙品中總生物堿并測定含量，并通過小白鼠灌胃給藥測定爆壓品和生品的LD50，結(jié)果表明炮制后總生物堿含量與生品比較仍達(dá)92%~95.6%，而爆壓品的急性毒性下降38.3%，表明爆壓法既能降低馬錢子毒性又能保證其效價(jià)。丁宗華等[16] 比較了爆壓法、砂燙法及烘烤法發(fā)現(xiàn)三種炮制方法對馬錢子中生物堿主要成分含量分布影響差異不大。砂燙法受火候、溫度、加熱時間影響較大，對操作者的經(jīng)驗(yàn)要求高，而爆壓法操作簡單，加工周期短，受經(jīng)驗(yàn)影響少，較砂燙法和烘烤法工作效率更高。
2.1.5 發(fā)酵法
現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)由傳統(tǒng)發(fā)酵與現(xiàn)代生物技術(shù)相結(jié)合，一方面能保護(hù)中藥活性中心免遭破壞，另一方面通過對中藥毒性成分結(jié)構(gòu)修飾以產(chǎn)生新成分，這是中藥炮制的一個嶄新的途徑。潘揚(yáng)等運(yùn)用雙向固體發(fā)酵技術(shù)，以馬錢子為藥性基質(zhì)，選用20多種真菌進(jìn)行固體發(fā)酵，得到不同的藥性菌質(zhì)，用HPLC法測得其中馬錢子堿、士的寧含量顯著下降，而氮氧化物含量增加。劉亮鏡等利用朱紅栓菌發(fā)酵馬錢子，通過急性毒性實(shí)驗(yàn)及鎮(zhèn)痛抗炎實(shí)驗(yàn)，發(fā)酵后LD50 上升率為29.7，毒性下降，而鎮(zhèn)痛抗炎作用無明顯影響。劉學(xué)湘等優(yōu)化紅栓菌液體發(fā)酵馬錢子的培養(yǎng)條件，并測定了馬錢子堿和士的寧的含量變化，結(jié)果發(fā)酵液中馬錢子堿和士的寧總量降低8.74%，且馬錢子氮氧化物、士的寧氮氧化物含量增加。表明紅栓菌液體發(fā)酵馬錢子可以降低馬錢子毒性成分含量，達(dá)到降毒目的。潘自皓等通過優(yōu)化轉(zhuǎn)化工藝，使短刺小克銀漢霉對馬錢子堿硫酸鹽和士的寧硝酸鹽轉(zhuǎn)化率分別提高了約17%、22%，說明短刺小克銀漢霉微生物轉(zhuǎn)化體系可用于馬錢子減毒。
2.2 中藥配伍使用
中藥配伍使用是中藥用于治療的應(yīng)用形式，藥物通過配合相互作用，可減輕毒性，增強(qiáng)療效，是毒性藥材應(yīng)用的重要方法之一。
2.2.1 配伍甘草
閆靜等研究了馬錢子配伍甘草前后生物堿成分的變化，發(fā)現(xiàn)士的寧含量比生品下降31.65%，較為顯著，而馬錢子堿下降16.5%。唐進(jìn)法測定了馬錢子與不同配比甘草配伍前后煎液中馬錢子堿和士的寧含量，結(jié)果配伍后含量較單煎均有下降。婁玉鈐等通過急性毒性實(shí)驗(yàn)測定了馬錢子配伍甘草后的LD50 比馬錢子單煎均有提高，表明配伍不同比例甘草后均能降低馬錢子毒性，且與配伍中甘草含量成正比。邢盼盼[25] 用馬錢子堿與甘草次酸、甘草苷配伍，發(fā)現(xiàn)甘草解馬錢子之毒是由于甘草苷對馬錢子堿導(dǎo)致CYP450酶異常變化的拮抗作用和甘草次酸抑制CYPZEI和CYPIAZ的活性，一定程度上闡明了甘草降低馬錢子毒性的機(jī)制。
2.2.2 配伍生地黃、熟地黃
梁曉東等研究發(fā)現(xiàn)，馬錢子配伍生地黃對大鼠關(guān)節(jié)腫脹有明顯抑制作用，最佳配比為1∶6，且對免疫系統(tǒng)有保護(hù)作用;馬錢子配伍生地黃后，馬錢子堿和士的寧含量與生地黃比例有關(guān)，馬錢子、生地黃1∶2煎劑，馬錢子堿、士的寧分別降低19.49%和0.23%;馬錢子、生地黃1∶4煎劑中馬前子堿和士的寧分別下降59.93%和31.95%。而馬錢子、生地黃1∶6時馬錢子堿、士的寧分別升高6.25%和43.22%，說明馬錢子、生地黃配伍比例可以影響減毒效果，馬錢子、生地黃比例為1∶4時減毒率為90.64%，減毒效果較佳。苗根旺等研究了制馬錢子配伍不同比例生、熟地黃的LD50和抗炎鎮(zhèn)痛效果，實(shí)驗(yàn)表明，生、熟地黃配伍均能降低馬錢子毒性，且在表現(xiàn)趨勢上有一致性，不同配伍比例對其抗炎鎮(zhèn)痛效果無明顯影響。
2.2.3 配伍白芍
劉燁等測定了馬錢子配伍白芍前后馬錢子堿和士的寧含量變化，結(jié)果表明，與白芍配伍后馬錢子堿和士的寧含量均有下降，以馬錢子、白芍比為1∶6 時最佳，其中馬錢子堿和士的寧分別降低19.88% 和 30.17%，馬錢子配伍白芍能夠降低馬錢子毒性。唐迎雪等采用不同比例馬錢子、白芍水煎劑探討其對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)的治療作用，結(jié)果馬錢子、白芍配伍較單用馬錢子抗炎效果都有提高，說明配伍白芍可以增強(qiáng)馬錢子抗炎效果。
2.2.4 配伍赤芍
胡錫琴等發(fā)現(xiàn)馬錢子配伍赤芍后，LD50 明顯增大，且赤芍劑量與減毒作用呈正相關(guān)。王曉崴等測定了馬錢子配伍赤芍前后及其在人工胃液和人工腸液環(huán)境下其士的寧和馬錢子堿的含量，發(fā)現(xiàn)配伍后士的寧和馬錢子堿的含量均有不同程度的降低，其中士的寧下降更為顯著。
2.2.5 配伍肉桂、桂枝
閆雪生等測定了馬錢子配伍白芍前后馬錢子堿和士的寧主含量變化，結(jié)果士的寧下降達(dá)66.75%，馬錢子堿下降達(dá) 58.73%。說明馬錢子與肉桂配伍具有減毒之效。李朝陽等[36] 用馬錢子與肉桂、桂枝配伍研究發(fā)現(xiàn)，肉桂及桂枝均對馬錢子均有減毒作用，其中，肉桂減毒率與肉桂劑量呈正相關(guān)，但與桂枝的減毒率有先升后降的情況;配伍肉桂桂枝對馬錢子鎮(zhèn)痛作用無明顯增強(qiáng)，但桂枝可明顯增強(qiáng)馬錢子的抗炎作用，可能與桂枝水提液中鞣酸樣物質(zhì)有關(guān)。
2.2.6 配伍蘇木
孫響波等在配伍蘇木對馬錢子抗炎實(shí)驗(yàn)研究表明，配伍蘇木能增強(qiáng)馬錢子的抗炎作用，但其增強(qiáng)作用與蘇木在配伍中的含量不呈正相關(guān)，以馬蘇比1∶8 時抗炎效果最佳。梁曉東等采用HPLC分別對不同比例配伍前后馬錢子堿和士的寧的含量進(jìn)行測定，結(jié)果與馬錢子單煎相比都有明顯下降，說明通過配伍蘇木可達(dá)到減毒作用，減毒效果以馬錢子、蘇木比1∶6 為佳。
2.3 新劑型與新方法
馬錢子因其治療量與中毒量接近，半衰期短，較少用于湯劑，多用于丸、散、片、膠囊、酊劑、膏等。近年來透皮給藥系統(tǒng)TTS因其可避免肝臟的首過效應(yīng)，提高藥物的生物利用度;可產(chǎn)生持久、可控血藥濃度，從而減輕不良反應(yīng);患者使用方便順應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，得到了眾多關(guān)注和研究，中藥透皮給藥制劑不斷發(fā)展。將馬錢子制成透皮給藥劑型，提高藥物的局部濃度，有利于患者局部炎癥和疼痛的治療，為馬錢子減毒增效開辟了新的途徑。
2.3.1 微乳
宋金春等制備了不同濃度馬錢子堿微乳，并考察了其對離體小鼠皮的透皮能力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明將藥物制成微乳能增加馬錢子堿的透皮吸收量并對其有延時釋放作用，馬錢子堿透皮吸收量隨載藥量增加而升高。
2.3.2 噴霧劑
孫亦群等將九分散改制為經(jīng)皮給藥制劑九分噴霧劑，并研究了其透皮釋放率，結(jié)果表明其釋放速率穩(wěn)定，可維持較穩(wěn)定的血藥濃度。
2.3.3 涂膜劑
郭立瑋等將馬錢子總堿溶液、聚乙烯醇、丙酮、氮酮、甘油和吐溫-80 等制成馬錢子涂膜劑，并采用正交試驗(yàn)優(yōu)化其處方，發(fā)現(xiàn)馬錢子堿能迅速經(jīng)皮吸收進(jìn)入血液。
2.3.4 凝膠劑
王絢等制備了馬錢子堿、馬錢子總生物堿和優(yōu)化馬錢子總生物堿凝膠劑，并考察了三種凝膠劑經(jīng)皮給藥后的小鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)過程，結(jié)果表明凝膠劑能增加馬錢子堿的透皮吸收量，且優(yōu)化馬錢子總生物堿凝膠劑的生物利用度優(yōu)于其他兩組，更有利于馬錢子的減毒增效。
2.3.5 貼膏劑
陳軍等制備了馬錢子堿貼膏劑、馬錢子堿-HP--CD 物理混合物貼膏劑、馬錢子堿包合物貼膏劑，24 h 累積透過率分別為(80.161.36)%、(85.471.89)%、(92.675.88)%，三種貼膏劑中馬錢子堿以包合物加入時，其體外透皮速率最為平穩(wěn)，累積透皮量最大，羥丙基-- 環(huán)糊精(HP--CD)的加入實(shí)現(xiàn)了藥物的控釋，產(chǎn)生持續(xù)平穩(wěn)的血藥濃度，減少毒副反應(yīng)。
2.3.6 脂質(zhì)體
將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)形成微型小囊。脂質(zhì)體作為載體使得藥物具有了靶向性，尤其增加了抗腫瘤藥物的療效，同時降低了其對非靶器官非靶細(xì)胞的毒性;脂質(zhì)體具有較高的細(xì)胞親和性，可增加被包封藥物的透過能力;降低消除時間，起到緩釋長效作用。馬錢子堿的抗腫瘤作用已得到公認(rèn)，因此以脂質(zhì)體作為載體應(yīng)用是對馬錢子減毒增效的有效途徑。張路等制備了納米級馬錢子堿脂質(zhì)體，并考察了其透皮性能，發(fā)現(xiàn)馬錢子堿脂質(zhì)體較乳膏能明顯降低滲透速度并基本保持較慢的速率恒速釋藥，且脂質(zhì)體累積滲透量(59.0%)較乳膏(12.3%)有顯著差異。鄧旭坤等比較了馬錢子堿及其脂質(zhì)體的抗腫瘤作用，發(fā)現(xiàn)兩者均能顯著抑制荷瘤小鼠腫瘤生長，且脂質(zhì)體抗腫瘤作用更為顯著。瞿葉清等用二硬脂酰乙醇胺- 聚乙二醇2000 修飾脂質(zhì)體制備了隱形脂質(zhì)體，以此作為馬錢子堿的載體，并與普通脂質(zhì)體比較了抗腫瘤作用，同劑量的馬錢子堿溶液、普通脂質(zhì)體、隱形脂質(zhì)體的抑瘤率分別為28.64%、57.%% 和71.36%。
3 結(jié)語
馬錢子作為傳統(tǒng)中藥，開通經(jīng)絡(luò)，透達(dá)關(guān)節(jié)之功遠(yuǎn)勝于它藥，雖有大毒但臨床應(yīng)用經(jīng)久不衰。本文主要從炮制、配伍及劑型等方面進(jìn)行了論述，但仍有以下幾點(diǎn)值得注意：傳統(tǒng)炮制方法成本低，經(jīng)過長期實(shí)踐證明了有效性，結(jié)合現(xiàn)代技術(shù)加以改進(jìn)可發(fā)揮更大作用。有研究表明馬錢子抗炎作用顯著跟馬錢子堿關(guān)系密切，而士的寧作用不明顯，可以嘗試生物堿的分離純化，從而降低毒性。對含有馬錢子的制劑應(yīng)建立的嚴(yán)謹(jǐn)?shù)馁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范用藥劑量等。馬錢子屬于毒藥猛劑善起沉疴之劑，隨著新技術(shù)、新劑型的發(fā)展，馬錢子會有更加廣闊的應(yīng)用前景。
談白藜蘆醇對炎癥反應(yīng)microRNA調(diào)節(jié)作用
微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類可調(diào)控基因表達(dá)且高度保守的非編碼小分子RNA，由約22個核苷酸構(gòu)成。1993年，miRNA在秀麗隱桿線蟲內(nèi)首次被發(fā)現(xiàn)，至今已發(fā)現(xiàn)的miRNA超過1 000種。作為一種新的基因表達(dá)調(diào)控因子，miRNA主要通過與靶基因3端非翻譯區(qū)(3Untranslated Regions，3-UTR)不完全配對，對mRNA進(jìn)行切割或抑制翻譯，促進(jìn)mRNA 降解或抑制其轉(zhuǎn)錄發(fā)揮其蛋白水平的調(diào)節(jié)功能。除能夠調(diào)控宿主細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)外，受到刺激的細(xì)胞還可以選擇性分泌miRNA，通過微粒體(microvesicles)、外泌體(exosomes)、高密度脂蛋白或RNA 結(jié)合蛋白如Argonaute2、nucleophosmin 1在細(xì)胞間進(jìn)行傳遞，進(jìn)而影響靶細(xì)胞的生物學(xué)功能。
1 miRNA與炎癥
炎癥是機(jī)體對外來傷害性刺激的一種防御反應(yīng)，適度的炎癥能夠幫助機(jī)體清除有害物質(zhì)、修復(fù)組織損傷。但如果無特定的內(nèi)部負(fù)調(diào)控子進(jìn)行嚴(yán)格控制，免疫反應(yīng)將無法及時終止，繼而導(dǎo)致多種不同形式的慢性炎癥性疾病，如心血管系統(tǒng)疾病、糖尿病、癌癥、阿爾茨海默病等。研究表明miRNA 直接參與了免疫細(xì)胞的分化成熟，通過與炎癥相關(guān)信號通路發(fā)生作用，調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子的合成及分泌影響免疫反應(yīng)，因而與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。在固有免疫中，單核/巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞通過細(xì)胞表面Toll樣受體(Toll-likereceptor，TLR)識別不同的病原體相關(guān)分子模式(pathogen associated molecular patterns，PAMPs)，激活細(xì)胞內(nèi)髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor88，MyD88)、干擾素Toll/IL-1受體結(jié)構(gòu)域銜接蛋白(Toll/IL-1receptor domain-containing adapterinducing interferon-，TRIF)、Toll/IL-1受體域接受子蛋白(Toll/IL-1receptor domain-containing adapter protein，TIRAP)介導(dǎo)的炎性通路，啟動免疫反應(yīng)。在此過程中亦可激活多種miRNA的表達(dá)，其中研究較為充分的是miR-155、miR-146a及miR-21。miR-155在脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)處理后的Raw-264巨噬細(xì)胞中顯著升高，且miR-155基因改造鼠對LPS的敏感性增強(qiáng)，更容易發(fā)生內(nèi)毒素休克。miR-146a及miR-21與miR-155促進(jìn)免疫反應(yīng)的作用相反，主要參與炎癥的負(fù)反饋調(diào)節(jié)從而弱化炎癥反應(yīng)。LPS 處理后的巨噬細(xì)胞可以通過TLR4/MyD88/NF-B通路誘導(dǎo)miR-21產(chǎn)生，miR-21可進(jìn)一步降解PDCD4蛋白，從而提高抗炎因子IL-10的水平，抑制NF-B 的活性形成負(fù)調(diào)控環(huán)路。與miR-21類似，miR-146a可以降低IL-6、TNF-等促炎物質(zhì)水平。在適應(yīng)性免疫中，miRNA可以通過干預(yù)T細(xì)胞、B細(xì)胞分化成熟以及激活后的行為，從而從多個環(huán)節(jié)對免疫反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)。淋巴細(xì)胞成熟過程中，機(jī)體主要通過凋亡清除不能行使正常免疫功能的細(xì)胞克隆;miR-17-92簇可以通過抑制前凋亡因子BIM、PTEN 信號通路阻止T細(xì)胞陰性、陽性選擇過程，誘發(fā)淋巴細(xì)胞增生性疾病。淋巴細(xì)胞成熟后進(jìn)入外周循環(huán)，接受不同的抗原刺激分化為不同的細(xì)胞亞型，產(chǎn)生不同的免疫效應(yīng)。如Th1主要參與細(xì)胞內(nèi)感染及遲發(fā)型超敏反應(yīng)，Th2則介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，參與Ⅰ型超敏反應(yīng)。miR-155可在活化后的CD4+ T細(xì)胞中表達(dá)，降低miR-155的表達(dá)能夠提高細(xì)胞內(nèi)cMaf蛋白的水平，使其向Th2分化增多，向Th1、Th17分化減少;另一種影響T細(xì)胞分化的miRNAmiR-326，可以通過靶定抑制Th17分化的Ets1因子，進(jìn)而干預(yù)自身免疫性疾病進(jìn)展。就B 細(xì)胞而言，致敏后的B-2細(xì)胞若缺乏miR-155可導(dǎo)致抗體親和力降低，抗體分泌減少，這可能與PU.1因子的過表達(dá)有關(guān)。
2 白藜蘆醇與炎癥
白藜蘆醇(3，4，5-三羥基芪)是一種生物性很強(qiáng)的天然多酚類物質(zhì)，又稱為芪三酚白藜蘆醇，其最先被發(fā)現(xiàn)能夠抑制皮膚癌大鼠模型腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。白藜蘆醇也被用來預(yù)防和(或)治療肥胖和糖尿病。同時，白藜蘆醇的毒性很小，即使是在快速更新的組織，如骨髓和消化道也未產(chǎn)生明顯的不良反應(yīng)。白藜蘆醇主要通過其m-羥基二苯乙烯(m-hydroxyquinone)及4-羥基苯乙烯基(4-hydroxystyryl)位點(diǎn)發(fā)揮對多種酶的抑制效應(yīng)。這些酶中包括通過水解花生四烯酸產(chǎn)生促炎介質(zhì)的脂氧合酶、環(huán)氧酶、蛋白激酶C和D、受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase，RTK)、IB激酶(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase，IKK)等。因此，白藜蘆醇在炎癥過程及腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著巨大的作用。白藜蘆醇之所以能夠影響如此之多的細(xì)胞因子并發(fā)揮如此廣泛的保健作用，說明它的調(diào)控作用依賴于細(xì)胞內(nèi)某些能夠影響整體的物質(zhì)。另一方面，miRNA可以潛在地影響上百個目的基因的活性，因此，白藜蘆醇可能通過調(diào)節(jié)miRNA組成比例來發(fā)揮其廣泛的細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)作用。研究證實(shí)，白藜蘆醇可以降低促炎或促癌的miRNA 的水平，提高抗炎、抗腫瘤miRNA的含量。
3 白藜蘆醇通過調(diào)節(jié)miRNA介導(dǎo)炎癥反應(yīng)
3.1 白藜蘆醇與miR-21
miR-21也叫做hsamiR-21，編碼基因定位于17q 23.2。miR-21與心血管疾病關(guān)系十分密切。在動脈硬化中，miR-21可以通過TLR4/NF-B 信號通路促進(jìn)LPS處理后的RAW 264.7巨噬細(xì)胞攝入氧化型低密度脂蛋白(oxidized-low density lipoprotein，ox-LDL)，形成充滿脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞，從而影響粥樣斑塊的形成和穩(wěn)定性[16];miR-21可以下調(diào)RECK 基因的表達(dá)，進(jìn)而上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (matrix metallopeptidase 9，MMP-9)使斑塊纖維帽變薄，更易破裂;miR-21也參與了其他心血管疾病的發(fā)生發(fā)展，如心力衰竭、球囊損傷后血管平滑細(xì)胞的增殖及內(nèi)膜增厚等。此外，在多種癌細(xì)胞系中均檢測到其含量異常，是目前公認(rèn)的致癌性miRNA。已鑒定的miR-21調(diào)控基因絕大多數(shù)為抑癌基因，如BTG2基因、RhoB基因、P12/CDK2AP1信號通路等。白藜蘆醇可降低miR-21含量，從而降低Akt/Bcl-2通路的活性，促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡。miR-21能夠抑制LRRFIP1蛋白的表達(dá)，從而激活NF-B通路，促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U251 的成活和增殖;加入白藜蘆醇的U251細(xì)胞凋亡增加，NF-B通路受到抑制，但先加入miR-21則不能觀察到白藜蘆醇對IB磷酸化及NF-B轉(zhuǎn)錄活性的抑制，因此白藜蘆醇能夠通過降低miR-21含量抑制NF-B活性。
3.2 白藜蘆醇與miR-663
miR-663是一種靈長類動物特有的miRNA，參與了多種重要的生命活動，包括病毒感染、免疫應(yīng)答及自身免疫性疾病等。在腫瘤疾病中，miR-663在不同來源的惡性腫瘤表現(xiàn)出不同的作用。在肺癌、鼻咽癌及乳腺癌中，miR-663為致癌基因并促進(jìn)腫瘤的惡變。但在胃癌、直腸結(jié)腸癌、前列腺癌、急性淋巴細(xì)胞型白血病中，miR-663起抑癌作用。AP-1蛋白在人腫瘤細(xì)胞中高度表達(dá)，且在腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移中至關(guān)重要。白藜蘆醇可通過miR-663依賴的方式降低AP-1的活性，抑制LPS處理后miR-155的升高，進(jìn)而發(fā)揮抗炎、抗腫瘤的作用。白藜蘆醇還可通過miR-663 抑制TGF1/Smad 信號通路，而TGF通路是人類癌癥中常發(fā)生突變的信號通路之一。此外，血液流變學(xué)的改變也會影響miR-663的 含量。剪切應(yīng)力為血流與管壁摩擦產(chǎn)生的平行于管壁的切線應(yīng)力，振蕩剪切應(yīng)力會損傷動脈內(nèi)皮功能，并與動脈粥樣硬化密切相關(guān);暴露于振蕩剪切力下的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelialcell，HUVEC)miR-633大量表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控多種炎性基因如KLF4因子(Kruppel-like factor 4，KLF4)、C/EBP蛋白并促進(jìn)單核細(xì)胞的粘附從而介導(dǎo)內(nèi)皮的炎性反應(yīng)。一項(xiàng)在同時患有2型糖尿病、高血壓病及冠心病人群中展開的研究表明，在正常藥物治療的同時服用白藜蘆醇，可使患者血清中的CCL3促炎性因子、IL-1、TNF-及外周血單核細(xì)胞miR-663、miR-21、miR-155的表達(dá)顯著降低，從而初步證明了白藜蘆醇可通過miRNA調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)。
3.3 白藜蘆醇和miR-200c
miR-200家族主要包括包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429，根據(jù)基因組定位不同可分為兩個基因簇，miR-200a、miR-200b、miR-429 位于1號染色體，miR-200c 及miR-141 位于12 號染色體。miR-200在上皮組織中含量豐富并與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。較高的血清miR-200c水平與結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移之間顯著相關(guān)，同時亦有助預(yù)測CRC患者的預(yù)后或復(fù)發(fā)，是一種潛在的高效非侵襲標(biāo)記物miRNA。而白藜蘆醇可以通過影響Argonaute2的活性，進(jìn)而影響包括miR-200c在內(nèi)多種miRNA含量。
miRNA 是近年來新的研究熱點(diǎn)，幾乎參與調(diào)節(jié)各種生物學(xué)功能(從細(xì)胞分化、增殖和凋亡到病理生理狀態(tài))，有望成為多種疾病的生物標(biāo)志物及新的藥物干預(yù)靶點(diǎn)。白藜蘆醇及miRNA 與免疫應(yīng)答的關(guān)系十分密切，近年來，越來越多的資料表明白藜蘆醇可以通過影響miRNA 的表達(dá)進(jìn)而參與到炎癥反應(yīng)之中。但白藜蘆醇可同時影響數(shù)十甚至上百種miRNA，明確白藜蘆醇調(diào)控某種特定miRNA 的表達(dá)以及miRNA之間的相互作用顯得尤為重要，也是目前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。因此，隨著研究的不斷深入，筆者期待更多與白藜蘆醇相關(guān)的miRNA 被發(fā)現(xiàn)并明確miRNA之間相互影響的機(jī)制，不僅能夠更為深刻地理解miRNA與免疫應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)，也能為慢性炎癥相關(guān)疾病提供新思路及新靶點(diǎn)。
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