有關(guān)于醫(yī)學(xué)論文的范文的特輯
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談川芎素對(duì)結(jié)直腸癌Lovo 細(xì)胞生長(zhǎng)的體內(nèi)外抑制作用及機(jī)制
中藥是我國(guó)的特色治療方式之一，目前已有多種中藥制劑獲批用于常規(guī)手段無(wú)效時(shí)的腫瘤治療。川芎素廣泛用于心腦血管疾病的治療，近年來(lái)其抗腫瘤活性成為研究的熱點(diǎn)。川芎素對(duì)人結(jié)直腸癌是否具有抑制作用，目前尚不明確。2015 年5 月～ 2016 年5 月，我們?cè)隗w內(nèi)外觀察了川芎素對(duì)結(jié)直腸癌Lovo 細(xì)胞的抑制作用，并探討其可能的機(jī)制。
1 材料與方法
1. 1 材料
川芎素( 阿魏酸鈉) 成都制藥一廠生產(chǎn)，100 mg /支，工作濃度100 mg /mL，人結(jié)直腸癌Lovo 細(xì)胞購(gòu)自中科院細(xì)胞庫(kù)，RPMI 1640 培養(yǎng)基購(gòu)自GIBCO 公司; AnnexinⅤ-FITC /PI 試劑盒購(gòu)自南京凱基公司，鼠抗人pro-Caspase3 單克隆抗體、鼠抗人Bcl-2 單克隆抗體購(gòu)自Santa 公司; SPF 級(jí)裸鼠購(gòu)自上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
1. 2 實(shí)驗(yàn)方法
1. 2. 1 細(xì)胞培養(yǎng)與分組處理37 ℃、5% CO2下將Lovo 細(xì)胞于含10% 小牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞分為兩組。觀察組分別與終濃度為0. 125、0. 25、0. 5、1. 0 mg /mL 川芎素共培養(yǎng)，對(duì)照組不加川芎素。
1. 2. 2 Lovo 細(xì)胞活力觀察采用MTT 法。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞制成1 105 /mL 的細(xì)胞懸液，以100L /孔接種96 孔板，分組處理同1. 2. 1。培養(yǎng)24 h每孔加入5 mg /mL 的MTT 20 L，孵育6 h 每孔加入20%的SDS 50 L /孔，過(guò)夜，測(cè)定570 nm 吸光度( A) 值。細(xì)胞活力指數(shù)= ( 觀察組A570 /對(duì)照組A570) 100。
1. 2. 3 Lovo 細(xì)胞周期檢測(cè)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Lovo 細(xì)胞，分組處理同1. 2. 1。培養(yǎng)24 h 后以70% 冰乙醇固定細(xì)胞，4℃碘化丙啶避光染色30 min，用FACSCalibur檢測(cè)細(xì)胞周期。
1. 2. 4 Lovo 細(xì)胞凋亡檢測(cè)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Lovo細(xì)胞，分組處理同1. 2. 1。分別于培養(yǎng)6、12、24 h，以3 000 L 1 緩沖液[100 mmol /L HEPES ( pH7. 4) ，1. 4 mmol /L NaCl，25 mmol /L CaCl2]懸浮細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1 106 /mL。取100 L 細(xì)胞懸液到流式管，加入5 L AnnexinV-FITC 和10 L PI( 20 g /mL) ，避光孵育20 min，加入400 L PBS 后用FACSCalibur 檢測(cè)凋亡細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞凋亡率。
1. 2. 5 川芎素體內(nèi)抑瘤作用觀察取裸鼠14 只，于其左腋下靠背部皮下注射Lovo 細(xì)胞懸液100 L。10 d 后待腫瘤體積至約100 mm3，隨機(jī)將裸鼠分2組各7 只。觀察組靜脈注射0. 5 mg /mL 的川芎素50 L，對(duì)照組靜脈注射等量生理鹽水，隔日給藥7次。給藥前及給藥后每隔2 d 測(cè)量裸鼠瘤體長(zhǎng)徑( L) 和短徑( W) 。腫瘤體積( mm3 ) = 1 /2W2 L。
1. 2. 6 Lovo 細(xì)胞及腫瘤組織Bcl-2、pro-Caspase3 檢測(cè)采用Western blot 法。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Lovo 細(xì)胞隨機(jī)分為兩組，觀察組與終濃度1 mg /mL 的川芎素共培養(yǎng)，對(duì)照組不處理。收集培養(yǎng)24 h 后的細(xì)胞，并分離兩組裸鼠腫瘤組織; 抽提蛋白，SDS-PAGE 電泳后轉(zhuǎn)PVDF 膜，5% BSA 封閉; 加入1∶ 4 000 稀釋的鼠抗人Bcl-2 單抗或1∶ 5 000 稀釋鼠抗人pro-Caspase3單抗，以1∶ 2 000 稀釋的鼠抗人-actin 作內(nèi)參，4 ℃孵育過(guò)夜; 加1∶ 2 000 稀釋的HRP 標(biāo)記的二抗，室溫孵育1 h; 洗膜，檢測(cè)并掃描，以目的條帶與內(nèi)參條帶的光密度比值作為目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。
1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS15. 0 統(tǒng)計(jì)軟件。結(jié)果以珋x s 表示，數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析及LSDt檢驗(yàn)。P 0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2. 1 川芎素對(duì)Lovo 細(xì)胞活力的影響觀察組分別與終濃度為0. 125、0. 25、0. 5、1. 0 mg /mL 川芎素共培養(yǎng)24 h 后，其細(xì)胞活力指數(shù)分別為81. 23 6. 58、75. 69 6. 34、62. 18 3. 29、58. 39 2. 69。終濃度0. 125 mg /mL 與終濃度0. 5、1. 0 mg /mL 的細(xì)胞活力指數(shù)比較，P 均 0. 05。其他濃度間比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3 討論
目前，川芎素已廣泛用于治療腦血管病、冠心病、白細(xì)胞和血小板減少癥等疾病。川芎素藥理作用復(fù)雜，研究表明其具有抗氧化及抑制血栓形成等效果，還有報(bào)道川芎素能夠抑制氧化導(dǎo)致的平滑肌細(xì)胞增殖，但是川芎素和腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的關(guān)系研究較少。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隔日瘤內(nèi)注射0. 5 mg /mL 川芎素治療荷Lovo 細(xì)胞豚鼠，7次用藥后，與對(duì)照組比較，其腫瘤體積明顯縮小。這表明Lovo 細(xì)胞的生長(zhǎng)能被川芎素抑制，與本研究MTT 實(shí)驗(yàn)結(jié)果相互印證。G1 /S期和G2 /M 期是細(xì)胞周期兩個(gè)重要檢測(cè)點(diǎn)，在此期能夠發(fā)現(xiàn)DNA 的損傷甚至突變，阻滯受損的細(xì)胞于相應(yīng)位點(diǎn)上并進(jìn)行修復(fù)DNA，只有DNA 修復(fù)完好后，接下來(lái)的細(xì)胞周期事件才能順序進(jìn)行; 如修復(fù)不能完成，則會(huì)引發(fā)細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，觀察組Lovo 細(xì)胞經(jīng)不同濃度川芎素作用24 h 后，G1期細(xì)胞比例減少顯著，S 期細(xì)胞呈明顯堆積，且細(xì)胞凋亡率增加。表明川芎素既能阻滯細(xì)胞于周期當(dāng)中，又能引發(fā)細(xì)胞凋亡。
作為細(xì)胞凋亡的通路之一，線粒體途徑中有與凋亡相關(guān)的蛋白被線粒體釋放，整個(gè)過(guò)程由Bcl-2 家族的蛋白調(diào)控。凋亡抑制蛋白與誘導(dǎo)蛋白都是Bcl-2 家族成員，Bcl-2 是凋亡抑制蛋白，抗癌藥物的敏感性受其表達(dá)水平的影響。Caspase 依賴性凋亡的執(zhí)行者是Caspase3，其由胞質(zhì)中的pro-Caspase3 剪切而來(lái)，核酸內(nèi)切酶CAD 進(jìn)而被激活，發(fā)生染色質(zhì)聚集、DNA降解等生物學(xué)效應(yīng)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，川芎素能夠降低Bcl-2 及pro-Caspase3 水平，凋亡抑制可被Bcl-2 低水平表達(dá)解除，降低pro-Caspase3 后Caspase3 活化水平升高，最終引起細(xì)胞凋亡。
綜上所述，川芎素阻滯了人結(jié)直腸癌Lovo 細(xì)胞在S 期，并抑制Bcl-2 的表達(dá)，Caspase3 被激活，細(xì)胞轉(zhuǎn)入凋亡步驟，在體內(nèi)外抑制Lovo 細(xì)胞的生長(zhǎng)。
談靶向腫瘤干細(xì)胞天然藥物的研究進(jìn)展
腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cell，CSC)是腫瘤組織中存在的極小部分細(xì)胞，通常處于靜止?fàn)顟B(tài)，當(dāng)受到細(xì)胞因子等影響時(shí)會(huì)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，這均源于CSC 擁有很強(qiáng)的自我更新及增殖分化的能力。關(guān)于CSC 的來(lái)源目前仍存在諸多爭(zhēng)議，然而科學(xué)家們已相繼在多種腫瘤組織中分離得到CSC，比如乳腺、肝臟、結(jié)腸、大腦、頭頸、胰腺、卵巢及白血病等。隨著手術(shù)、化療、放療等多種有效療法的應(yīng)用，以及疾病的早期篩查，癌癥患者的存活率雖有所提高，但仍有50%的患者會(huì)遭遇病情復(fù)發(fā)，而化療藥物的應(yīng)用也會(huì)極大程度地富集CSC。因此更多的學(xué)者認(rèn)為徹底治愈腫瘤的有效療法除針對(duì)腫瘤組織中的大部分腫瘤細(xì)胞， 更重要的是靶向其中的腫瘤干細(xì)胞，由此引發(fā)靶向干細(xì)胞的藥物研究成為腫瘤研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)許多中藥、天然藥物的有效成分對(duì)CSC 有明顯的作用，能有效提高CSC 的化療敏感性，靶向腫瘤發(fā)生等過(guò)程的分子信號(hào)通路，為腫瘤的藥物治療提供了新的途徑。本文對(duì)近年來(lái)靶向腫瘤干細(xì)胞的中藥及天然藥物進(jìn)行了總結(jié)與分析。
1 小白菊內(nèi)酯(parthenolide，PTL)
由菊科植物艾菊中分離純化出的倍半萜內(nèi)酯化合物PTL 能夠成為最近的研究熱點(diǎn)，得益于其抗腫瘤活性、DNA 抑制及促使腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物產(chǎn)生致敏能力等作用。作為核轉(zhuǎn)錄因子-B(nuclear factor-B，NF-B)的有效抑制劑，PTL 已被證實(shí)可誘導(dǎo)人急性髓細(xì)胞性白血病(acute myelocytic leukemia，AML) 干細(xì)胞的凋亡并對(duì)正常血液細(xì)胞無(wú)任何損傷效應(yīng)， 是治療白血病的潛在藥物。研究發(fā)現(xiàn)，PTL能夠靶向抑制鼻咽癌側(cè)群細(xì)胞并下調(diào)增強(qiáng)CSC 特性的環(huán)氧酶(cyclooxygenase-2，COX-2)， 通過(guò)抑制B 抑制因子(inhibitor B，IB)激酶復(fù)合體(IB kinase，IKK) 的磷酸化作用和IB 的降解來(lái)發(fā)揮抗腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的作用。PTL 在非小細(xì)胞肺癌腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞中引起強(qiáng)烈的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)而誘導(dǎo)其凋亡，與放射性化療協(xié)同作用使骨肉瘤CSC顯著減少。Gunn 等利用在細(xì)胞外基質(zhì)生長(zhǎng)細(xì)胞的三維組織培養(yǎng)體系模擬重建人骨髓， 將細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)藥物的耐受作用和對(duì)腫瘤細(xì)胞的保護(hù)作用考慮進(jìn)去，證實(shí)了PTL 是抗多發(fā)性骨髓瘤干細(xì)胞的有效天然藥物， 與非CSC 相比，PTL 對(duì)CSC 有更強(qiáng)的毒性作用。盡管PTL 是抗CSC 的新型化合物，其極低的水溶性卻限制了它的臨床應(yīng)用， 體內(nèi)代謝也會(huì)進(jìn)一步降低PTL 的治療效果。在上述模擬條件下，該研究組發(fā)現(xiàn)，與非致瘤性腫瘤細(xì)胞相比，PTL 氟化物對(duì)多發(fā)性骨髓瘤干細(xì)胞有更強(qiáng)的抑制作用， 而PTL氯化物的作用則相反。此外，PTL 二甲氨基類似物可有效改善PTL 的水溶性及生物利用度，已成功地用于消除AML 干細(xì)胞。Long 等用木香烴內(nèi)酯半合成得到60%收率的PTL 環(huán)丙基類似物在酸性環(huán)境及血漿中的穩(wěn)定性極強(qiáng)，將其分別作用于白血病細(xì)胞、CD34+白血病始祖細(xì)胞及CD34+CD38-白血病干細(xì)胞，細(xì)胞存活率分別為15.3%、9.2%、6.0%，說(shuō)明PTL環(huán)丙基類似物能夠選擇性消除AML 始祖/干細(xì)胞。PTL 的低滲透性限制了其進(jìn)入腫瘤細(xì)胞、進(jìn)入血液循環(huán)而發(fā)揮作用， 若進(jìn)一步研究提高其滲透性的衍生物，則能發(fā)揮更大的作用。
2 姜黃素(curcumin)
姜黃素是姜黃植物根莖的有效成分， 作為傳統(tǒng)食療劑，具有抗炎、抗氧化、降血脂、抗腫瘤等活性，不斷有研究證明姜黃素可以通過(guò)靶向CSC 來(lái)發(fā)揮抗腫瘤活性。Marquardt 等[8]發(fā)現(xiàn)姜黃素通過(guò)靶向抑制NF-B 通路選擇性抑制肝癌干細(xì)胞，肝癌干細(xì)胞的消除能力與NF-B 抑制程度直接相關(guān)?；虮磉_(dá)分析顯示姜黃素在一定程度上是通過(guò)抑制NF-B信號(hào)通路引起組蛋白去乙酰化酶的抑制來(lái)發(fā)揮肝癌干細(xì)胞消除能力的。在乳腺癌的研究中，有報(bào)道發(fā)現(xiàn)姜黃素與表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯合用可特異性抑制STAT3 磷酸化、維持STAT3-NFB 的相互作用從而抑制乳腺癌CSC， 通過(guò)增強(qiáng)E 鈣黏蛋白/-catenin 的負(fù)反饋環(huán)抑制乳腺癌CSC。在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中， 姜黃素能抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的腫瘤球形成能力，通過(guò)促進(jìn)自噬從而促進(jìn)膠質(zhì)瘤始祖細(xì)胞的分化。除此之外，姜黃素還可抑制食管癌干細(xì)胞、頭頸癌腫瘤干細(xì)胞的形成。研究者發(fā)現(xiàn)姜黃素與FOLFOX 化療方案合用或單用姜黃素可顯著減少結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移CSC 的腫瘤球數(shù)目及乙醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase，ALDH)高活性細(xì)胞。在部分外植體中，姜黃素與奧沙利鉑、氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-Fu)三者連用有顯著的增殖抑制及促凋亡作用， 同時(shí)減少了干細(xì)胞標(biāo)志蛋白ALDH、CD133的表達(dá)。第一階段臨床劑量遞增試驗(yàn)證明了姜黃素的安全性，作為FOLFOX 輔藥每日劑量可達(dá)2g。
上述研究均表明姜黃素是治療多種腫瘤的潛在藥物，然而姜黃素具有水溶性極低、體內(nèi)吸收少、代謝快、生物利用度不高的特點(diǎn)，開發(fā)合成姜黃素修飾物是改善其生物利用度的最佳選擇。研究發(fā)現(xiàn)FOLFOX 化療方案聯(lián)合姜黃素二氟化物(difluorinatedcurcumin，CDF) 比聯(lián)合姜黃素能更有效地消除結(jié)腸癌干細(xì)胞，伴隨CD44+CD166+細(xì)胞減少、生長(zhǎng)抑制、克隆球裂解，以及通過(guò)誘導(dǎo)CSC 凋亡更有效地抑制腫瘤形成能力。進(jìn)一步的分子研究表明CDF 聯(lián)合FOLFOX 誘導(dǎo)消除CSC 與一些重要的信號(hào)通路EGFR、IGF-1R、NF-B 的衰減及其下游通路WNT/-catenin、COX-2 和c-Myc 的抑制有關(guān)， 且CSC 的凋亡與Bax/Bcl-XL 增大相關(guān)。Bao 等認(rèn)為CDF 可抑制因低氧誘導(dǎo)因子引起的VEGF、IL-6 升高，前列腺癌/胰腺癌CSC 標(biāo)記基因Nanog、Oct4、EZH2 及致癌miR-21 的高表達(dá)。Basak 等證明CDF 脂質(zhì)體在體內(nèi)外對(duì)頭頸癌CSC 有顯著抑制作用。Wei 等發(fā)現(xiàn)膽甾醇基透明質(zhì)酸姜黃素類似物能夠顯著增強(qiáng)姜黃素靶向消除CD44+乳腺癌干細(xì)胞的能力?？梢?jiàn)，姜黃素及其類似物作用于CSC 的機(jī)制多樣，但以上結(jié)果大多局限于體外研究， 并且姜黃素的副作用及DNA 損害都將限制其臨床運(yùn)用，有研究報(bào)道姜黃素能促進(jìn)DCLK1+結(jié)腸癌干細(xì)胞的生存，嚴(yán)重干擾了其抗腫瘤作用， 運(yùn)用RNA 干擾技術(shù)沉默DCLK1 標(biāo)志蛋白后發(fā)現(xiàn)， 姜黃素顯著促進(jìn)體內(nèi)外結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡。就目前的研究狀況觀察，姜黃素對(duì)多種腫瘤和腫瘤干細(xì)胞都有明確的靶向作用， 如何將姜黃素有效地應(yīng)用于臨床還需進(jìn)行更深刻的體內(nèi)研究設(shè)計(jì)及臨床研究。
3 紫花牡荊素(casticin，CAS)
由馬鞭草科植物的干燥成熟果實(shí)蔓荊子提取的紫花牡荊素是一種多甲氧基黃酮類化合物， 和多種黃酮類化合物一樣， 紫花牡荊素也是抗腫瘤的天然藥物成分。Feng 等通過(guò)高通量篩選發(fā)現(xiàn)CAS 抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的腫瘤球形成能力。研究人員用無(wú)血清懸浮培養(yǎng)法在非小細(xì)胞肺癌A549 細(xì)胞系中富集具有自我更新及高侵襲能力，體內(nèi)具有高致瘤性，以及干細(xì)胞標(biāo)志分子CD133、CD44、ALDH1 高表達(dá)的肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)CAS 對(duì)該干細(xì)胞樣細(xì)胞有抑制增殖的作用， 且抑制作用遠(yuǎn)強(qiáng)于對(duì)A549 細(xì)胞系的作用。除此，CAS 能夠抑制肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞的自我更新和侵襲能力， 并伴隨CD133、CD44、ALDH1 蛋白表達(dá)的降低及MMP-9 活性的減弱。進(jìn)一步研究表明，CAS 一定程度上可通過(guò)抑制AKT 磷酸化作用來(lái)抑制肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞。He 等在MHCC97 肝癌細(xì)胞系中分離到肝癌干細(xì)胞， 發(fā)現(xiàn)CAS 同樣對(duì)肝癌干細(xì)胞有顯著的增殖抑制作用，可降低肝癌干細(xì)胞球形成能力，下調(diào)-catenin 蛋白表達(dá)。該研究組認(rèn)為分離于SMMC-7721 肝癌細(xì)胞系的CD133+細(xì)胞，不僅在體外具有較強(qiáng)腫瘤球形成能力，在Balb/c-nu 裸鼠中也有高致瘤性，因此CD133+細(xì)胞具有肝癌干細(xì)胞樣特性。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CAS 可增加E 鈣黏蛋白的表達(dá)并降低N 鈣黏蛋白表達(dá)，作用于肝癌干細(xì)胞48h 后也降低了上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子Twist， 而Twist 蛋白的過(guò)表達(dá)能夠減弱CAS誘導(dǎo)的E/N 鈣黏蛋白的表達(dá)變化并減弱肝癌干細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化抑制。因此認(rèn)為CAS 是通過(guò)下調(diào)Twist 蛋白抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而靶向肝癌干細(xì)胞的。
4 白藜蘆醇(resveratrol，Res)
白藜蘆醇是多酚類化合物，在葡萄、虎杖等植物中含量豐富，具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、保護(hù)心血管、肝臟、美容減肥等多種生物學(xué)活性，其抗腫瘤作用是近年研究的熱點(diǎn)。Yang 等[25]用無(wú)血清培養(yǎng)法從人結(jié)腸癌HCT116 中分離到CD133、CD44 高表達(dá)的結(jié)腸癌CSC， 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Res 能顯著抑制該CSC 的增殖且呈時(shí)間和劑量依賴性， 使處于G0/G1階段的細(xì)胞增多， 凋亡也相對(duì)增加;Res 還能上調(diào)CSC 組織相容性抗原的表達(dá)并增強(qiáng)其免疫原性。Sayd 等發(fā)現(xiàn)Res 濃度在150mol/L 前都能夠抑制膠質(zhì)瘤干細(xì)胞增殖，當(dāng)劑量更高時(shí)會(huì)誘導(dǎo)其壞死，但對(duì)正常神經(jīng)干細(xì)胞卻無(wú)影響。進(jìn)一步的Westernblot 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)依賴NAD + 的去乙?；竤irtuins(NAD-dependent deacetylases sirtuins，SIRT) 中的SIRT1 和SIRT3 均存在于膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及正常神經(jīng)干細(xì)胞，SIRT2 在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中的表達(dá)則受限。通過(guò)小分子RNA 干涉使SIRT2 表達(dá)下調(diào)能夠抵消Res 對(duì)CSC 增殖的抑制作用， 并不能抵消高劑量Res 引起的CSC 壞死， 因此認(rèn)為Res 可能通過(guò)SIRT2 對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞產(chǎn)生增殖抑制。黑素細(xì)胞刺激素(-melanocyte-stimulating hormone，-MSH)是已知的產(chǎn)生黑色素的主要途徑， 這一通路被證實(shí)與CSC 特性相關(guān)，Chen 等發(fā)現(xiàn)Res 能夠增強(qiáng)STI571抑制黑素瘤細(xì)胞中-MSH 通路的作用，并抑制黑素瘤細(xì)胞的生存能力和侵襲能力， 預(yù)示Res 可能具有作用于黑素瘤CSC 的潛力。miR-145 和miR-200c 在鼻咽癌CSC 中表達(dá)下調(diào)，有學(xué)者證實(shí)Res 通過(guò)激活p53 誘導(dǎo)miR-145 和miR-200c 并抑制鼻咽癌CSC 的干性、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及代謝重編程，若在Res激活p53 的分子機(jī)制上作進(jìn)一步研究很可能找到靶向鼻咽癌CSC 的新療法。人早幼粒細(xì)胞白血病KG-1a 細(xì)胞與白血病CSC 的特性極為相似，對(duì)化療藥物耐受并對(duì)細(xì)胞毒細(xì)胞弱敏，而25mol/L 的Res 能夠抑制50%KG-1a 細(xì)胞生長(zhǎng)， 這是通過(guò)NKG2D 配體和TRAIL (TNF-related apoptosis-inducing ligand)受體使KG-1a 細(xì)胞對(duì)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞所介導(dǎo)的細(xì)胞溶解敏感性增強(qiáng)而實(shí)現(xiàn)的。還有研究證實(shí)Res 能夠抑制人和KrasG12D 轉(zhuǎn)基因胰腺癌小鼠的胰腺癌CSC。Res 對(duì)包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫__瘤干細(xì)胞的抑制作用也均有報(bào)道， 可見(jiàn)從靶向腫瘤干細(xì)胞方向研究Res 的抗腫瘤作用極具開發(fā)價(jià)值。
5 蘿卜硫素(sulforaphane，SFN)
蘿卜硫素，又稱萊菔硫烷，在西蘭花、芥藍(lán)等十字花科植物中含量豐富， 可以造成癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞阻滯，是一種新型的抗癌活性成分，已成為癌癥新藥研發(fā)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。胰腺癌研究中，有報(bào)道SFN 能顯著增加順鉑、吉西他濱等化療藥物對(duì)胰腺癌及前列腺癌的細(xì)胞毒性作用，并且CSC 的克隆形成、球形成能力，ALDH1、Notch1 和c-Rel 的表達(dá)均受到顯著抑制，CSC 移植瘤的生長(zhǎng)也明顯被抑制，因此SFN 可增強(qiáng)常用化療藥靶向抑制CSC 的作用。Forster 等發(fā)現(xiàn)連接蛋白Cx43 在非侵襲性及有細(xì)胞間隙連接能力的細(xì)胞表面表達(dá)，而在高惡性、E 鈣黏蛋白缺失及無(wú)細(xì)胞間隙連接能力的細(xì)胞表面無(wú)表達(dá)。但SFN 能夠增加Cx43 和E 鈣黏蛋白的表達(dá)水平，改善細(xì)胞間隙連接并抑制胰腺癌CSC 表面標(biāo)記分子c-Met 和CD133 的表達(dá)。也有研究表明SFN體外可抑制胰腺癌CSC 的自我更新，將從人胰腺癌腫瘤組織中分離出的CSC 植入NOD/SCID 鼠的胰腺，SFN 通過(guò)下調(diào)SHH 通路的Smo、Gli1、Gli2 顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)。Labsch 等富集了晚期前列腺癌DU145 和PC3 細(xì)胞系及人源前列腺癌CSC，并通過(guò)球形成實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)和Westernblot 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SFN 和重組可溶性TRAIL 對(duì)該細(xì)胞的NF-B 活性、自我更新能力、分化潛能及干細(xì)胞信號(hào)通路的影響， 發(fā)現(xiàn)SFN 和TRAIL 在抑制CSC上有協(xié)同作用， 且與TRAIL 相比，SFN 對(duì)CSC 的影響更大，有更明顯的抗腫瘤作用。也有研究發(fā)現(xiàn)乳腺基底樣導(dǎo)管原位癌中有CSC 樣細(xì)胞，并鑒定其為具有ALDH1 活性的CD49f+/CD24-干細(xì)胞樣細(xì)胞，與非CSC 相比， 這些細(xì)胞表現(xiàn)出較強(qiáng)的遷移能力，而SFN 能夠靶向該CSC 樣細(xì)胞，減少ALDH1 的表達(dá)，降低球形成及克隆形成能力。
6 大豆異黃酮(isoflavone)
大豆異黃酮是大豆生長(zhǎng)過(guò)程中形成的一類具有生物活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物，廣泛存在于豆類、谷類、水果等植物中，在抗癌防癌研究中，大豆異黃酮是公認(rèn)的首選物質(zhì)，其中染料木黃酮(genistein，GEN)為其最有效的活性成分，有抗多種腫瘤的作用，尤其針對(duì)乳腺癌和前列腺癌。Fan 等采用微球形成實(shí)驗(yàn)證明GEN 能夠減少乳腺癌微球體的數(shù)量并降低其大小， 在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中， 該研究組以表面分子ALDH為指標(biāo)，通過(guò)免疫組化及RT-PCR 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GEN 能夠顯著降低ALDH 的染色、mRNA 及蛋白的表達(dá)。進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，GEN 可通過(guò)抑制Hedgehog-Gli1 通路從而抑制乳腺癌CSC。Yu 等從胃癌MKN45 細(xì)胞中分離到CD44+胃癌腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞， 與CD44-胃癌細(xì)胞相比，SHH 信號(hào)通路基因在CD44+細(xì)胞中表達(dá)較多。GEN 作用于CD44+細(xì)胞后，Gli1、CD44 的mRNA 及蛋白表達(dá)均顯著降低， 其他干細(xì)胞標(biāo)記分子的表達(dá)也有降低，除此之外，CD44+細(xì)胞的遷移能力也受到GEN 的阻止?？傊珿EN 可能通過(guò)抑制Gli1 基因的表達(dá)抑制胃癌腫瘤干細(xì)胞。Huang 等在胃癌研究中，發(fā)現(xiàn)GEN 能夠抑制胃癌CSC 的克隆形成能力、腫瘤球形成能力及CSC 表面標(biāo)記分子的表達(dá)， 其增強(qiáng)胃癌細(xì)胞耐藥性的作用可能與抑制ERK1/2 的活性有關(guān)。目前，關(guān)于天然化合物GEN 還未有不良反應(yīng)的相關(guān)報(bào)道，GEN 或許能夠提供一種全新的、安全有效的治療腫瘤的思路。除上述天然活性成分外，白楊素、水飛薊素、穿心蓮內(nèi)酯、槲皮素、熊果酸等都具有靶向抑制CSC的作用。有研究發(fā)現(xiàn)8-溴-7-甲氧基白楊素可通過(guò)下調(diào)肝癌干細(xì)胞中Twist 和-catenin 的表達(dá)抑制肝癌干細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和表面標(biāo)志CD133、CD44的表達(dá)，從而抑制肝癌干細(xì)胞的侵襲性、自我更新和增殖分化能力;水飛薊素可阻止致癌信號(hào)通路尤其是IL-4/-6 來(lái)抑制結(jié)腸癌CSC，通過(guò)影響PP2A/AKT/mTOR 通路抑制結(jié)直腸癌CSC，并可阻止ZEB1的表達(dá)，抑制膀胱癌CSC，與EGFR TKIs 合用可靶向抑制EGFR 基因突變的非小細(xì)胞肺癌CSC， 并削弱其躲避死亡的能力。此外，有報(bào)道槲皮素和蘿卜硫素可協(xié)同抑制胰腺癌CSC 的自我更新。
放眼整個(gè)中醫(yī)藥寶庫(kù)， 上述若干天然藥物只是冰山一角， 更多的具有抗腫瘤效應(yīng)的天然藥物單體仍不斷地被發(fā)現(xiàn)， 而抗腫瘤作用的機(jī)制也是不盡相同。目前關(guān)于各天然藥物的抗腫瘤機(jī)制雖不甚明朗，但通過(guò)科學(xué)家們的潛心研究可以預(yù)見(jiàn)天然藥物作為抗腫瘤藥物的美好前景。
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