探究溫腎調(diào)經(jīng)顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

　　溫腎調(diào)經(jīng)顆粒主要由當(dāng)歸、杜仲、菟絲子、肉蓯蓉、茜草等藥物組成，其處方來(lái)源于臨床驗(yàn)方，具有溫腎養(yǎng)血，利溫化濁，祛瘀調(diào)經(jīng)之功效，臨床上用于腎陽(yáng)不足，沖任血虛，濕濁瘀阻所致之月經(jīng)后期，經(jīng)量稀少，甚或經(jīng)閉不通的治療，效果顯著，是我國(guó)在多囊卵巢綜合征研究領(lǐng)域惟一進(jìn)入臨床階段研究的中藥制劑。本研究對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了定性和定量研究，制定了肉蓯蓉、菟絲子、茜草的薄層色譜定性鑒別，并建立了制劑中阿魏酸的高效液相色譜含量測(cè)定方法。

　　1.儀器與試藥

　　島津SCL-10AVP液相色譜儀(日本)，SPD-10AVP檢測(cè)器，Class-VP工作站，KQ3200DE型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);優(yōu)普超純水機(jī)UP-Ⅱ-10T(成都超純科技有限公司);1/萬(wàn)及1/10萬(wàn)電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。溫腎調(diào)經(jīng)顆粒(自制);毛蕊花糖苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)1530-200202);菟絲子對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)21232-200401);茜草對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，121049-0301);阿魏酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所，100834-200701);硅膠G(薄層色譜用，青島海洋化工廠);甲醇為色譜純，水為自制二次重蒸水，其他試劑均為分析純。

　　2.方法與結(jié)果

　　2.1定性鑒別

　　2.1.1肉蓯蓉的薄層色譜鑒別取本品10g，加甲醇50ml，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1～2ml使溶解，作為供試品溶液。另取麥角甾苷對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含2.5mg的溶液。另取不含肉蓯蓉的樣品同法制成陰性對(duì)照液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》[1]2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-9%醋酸(20:3:2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5% FeCl3乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾。

　　2.1.2菟絲子的薄層色譜鑒別取本品5g，加甲醇60ml，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至1～2ml，作為供試品溶液。另取菟絲子對(duì)照藥材1g，研碎，加甲醇20ml，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至1～2ml，作為對(duì)照藥材溶液。再取菟絲子陰性樣品同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇(5:5:3)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾。

　　2.1.3茜草的薄層鑒別取本品10g，加甲醇50 ml，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)勇确氯芙?，濾過(guò)，濾液濃縮至1～2 ml，作為供試品溶液。另取茜草對(duì)照藥材1g，研碎，加甲醇10ml，超聲處理30min，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取茜草陰性樣品同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(4:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾。

　　2.2阿魏酸的含量測(cè)定

　　2.2.1色譜條件Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流動(dòng)相為甲醇-5%醋酸(20:80);流速為1.0ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)323nm，柱溫35℃。

　　2.2.2對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置棕色量瓶中，加甲醇:5%醋酸(1:4)的溶液制成每1ml含阿魏酸10μg的溶液，即得。

　　2.2.3供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，取1.4g ，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇:5%醋酸(1:4)混合溶液25ml，稱(chēng)重，超聲處理(功率160W，頻率50kHz)40min，放冷，再稱(chēng)重，用以上溶劑補(bǔ)充減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)，即得。

　　2.2.4陰性對(duì)照溶液制備按處方比例稱(chēng)取除當(dāng)歸和川芎以外的藥材，按制備工藝制成缺當(dāng)歸和川芎的陰性樣品，按上述供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

　　2.2.5專(zhuān)屬性試驗(yàn)分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性對(duì)照溶液各20μl，注入液相色譜儀，結(jié)果表明，陰性對(duì)照品溶液在對(duì)照品、供試品溶液相對(duì)保留時(shí)間處無(wú)干擾峰出現(xiàn)，本研究方法可行。色譜峰見(jiàn)圖1。

　　2.2.6 線性范圍考察精密稱(chēng)取阿魏酸對(duì)照品適量,加甲醇:5%醋酸(1:4)混合溶劑制成每1ml含50μg的對(duì)照品溶液，分別精密吸取該溶液0.5、1.0、1.5、2.0、4.0ml置10ml量瓶中，用上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，分別吸取20μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算，以峰面積對(duì)濃度回歸，得回歸方程Y=118234X+3026.98 r=0.9999，結(jié)果表明：阿魏酸在2.50～20.00μg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

　　2.2.7精密度試驗(yàn)精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20μl，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD1.4%，表明本法精密度良好。

　　2.2.8重復(fù)性試驗(yàn)制備供試品溶液5份，分別進(jìn)樣，每次20μl，測(cè)定阿魏酸平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1205mg/g, RSD 0.56%,結(jié)果表明本法重復(fù)性好。

　　2.2.9穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)同一供試品溶液每隔3h進(jìn)樣1次，每次20μl，共4次，依法測(cè)定，結(jié)果阿魏酸峰面積RSD 0.41%，表明供試品溶液在9h內(nèi)穩(wěn)定。 A對(duì)照品;B 陰性對(duì)照;C.供試品

　　2.2.10加樣回收率試驗(yàn)取已知含量樣品粉末0.7g，精密稱(chēng)定，精密加入一定量阿魏酸對(duì)照品，按照擬定的方法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。表1阿魏酸加樣回收率試驗(yàn)(n=5)

　　2.2.11樣品測(cè)定分別取不同批號(hào)的樣品1.4g，精密稱(chēng)定，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，進(jìn)樣20μl，計(jì)算供試品含量，結(jié)果3批溫腎調(diào)經(jīng)顆粒中阿魏酸含量分別為0.1205、0.1221、0.1235 mg/g。

　　3.討論

　　肉蓯蓉、菟絲子、茜草為本品中主要的3味藥，本研究參考文獻(xiàn)[2],建立了以上3味藥材的TLC鑒別方法，結(jié)果表明所建立的方法展開(kāi)系統(tǒng)分離效果好，斑點(diǎn)清晰，專(zhuān)屬性強(qiáng)，陰性無(wú)干擾。本品為中藥復(fù)方制劑，成分比較復(fù)雜，處方中當(dāng)歸為君藥，故選定其活性成分阿魏酸作為定量檢測(cè)指標(biāo)，建立了HPLC含量測(cè)定方法、方法學(xué)研究表明該法具有簡(jiǎn)便、靈敏、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，可以用于本品的質(zhì)量控制方法。