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　　高二生物下冊《血紅蛋白的提取和分離》知識梳理

　　一、基礎知識:

　　1 、分離生物大分子的基本思路是什么?

　　2 、不同蛋白質的特性在哪些方面存在差異?

　　3 、本課題我們將利用血紅蛋白與雜質蛋白哪方面的差異進行提純?

　　4 、為什么不用雞的血紅細胞而用人的血紅細胞作為實驗材料?

　　5 、用什么方法分離相對分子質量不同的蛋白質 ?

　　凝膠色譜法

　　㈠ 凝膠色譜法(分配色譜法)：

　　1、什么是凝膠?

　　2、什么是凝膠色譜法?

　　學生活動2:

　　3、凝膠色譜法的原理是什么?

　　4、請用自己的話總結出凝膠色譜法分離相對分子質量不同蛋白質的具體過程。

　　1 、什么是緩沖液?

　　2、 緩沖液的作用是什么?

　　學生活動3:

　　3、 緩沖液是如何配置的?你所學過的人體

　　血液的緩沖液有哪些?

　　4、 本實驗加的是什么緩沖液?為何要加緩沖液?

　　(二)、緩沖溶液

　　1 、什么是電泳?

　　2、 影響電泳遷移速度的因素有哪些?

　　學生活動4:

　　4、電泳分離各種分子的原理是什么?

　　(三)、電泳

　　3、 如何消除電荷對電泳遷移速度的影響?

　　5 、請描述電泳的過程?

　　電泳檢測結果

　　二、實驗操作

　　蛋白質的提取和分離一般分為四步：

　　(1)樣品處理：包括洗滌紅細胞;血紅蛋白稀釋;離心等操作收集到的血紅蛋白溶液。

　　(2)粗分離：透析除去分子較小的雜質。

　　(3)純化：通過凝膠色譜法將分子量較大的雜質蛋白質除去。

　　(4)純度鑒定：通過聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。

　　(一)樣品處理

　　1、紅細胞的洗滌：

　　目的是去除雜蛋白。要加入檸檬酸鈉防止血液凝固;離心將血液分層，用膠頭吸管吸出黃色血漿;用生理鹽水洗滌。

　　2、血紅蛋白的釋放：

　　在蒸餾水和甲苯作用下，紅細胞破裂釋放

　　3、分離血紅蛋白溶液：

　　離心分層;濾紙過濾去除脂溶性沉淀層;分液漏斗分出紅色透明液體。

　　4、透析：

　　裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中(PH為7.0)透析。

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