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E花環(huán)形成的原理是什么

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E花環(huán)形成的原理是什么

  E花環(huán)你聽說過嗎?是不是以為是什么新型的花環(huán)編織方法?E花環(huán)是一種花環(huán)形成細(xì)胞,它的實驗是一種體外檢測人和動物細(xì)胞免疫功能的方法,常用于T淋巴細(xì)胞計數(shù)。你對E花環(huán)知道多少?下面由學(xué)習(xí)啦小編為你詳細(xì)介紹。

  E花環(huán)形成的原理:

  T淋巴細(xì)胞表面有綿羊紅細(xì)胞(SRBC)的受體(CD2),存在于95%成熟T淋巴細(xì)胞表面,能與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合,經(jīng)染色后,可見紅色的綿羊紅細(xì)胞與中央的藍(lán)色淋巴細(xì)胞組成玫瑰花瓣狀,形成花環(huán)樣,稱為E花環(huán)。凡表面粘附有3個或3個以上綿羊紅細(xì)胞(SRBC)者為花環(huán)形成細(xì)胞(即E陽性細(xì)胞)。

  E花環(huán)實驗原理:

  免疫學(xué)上用來檢測T細(xì)胞數(shù)量的一種實驗方法,T細(xì)胞表面具有能與綿羊紅細(xì)胞(SRBC)表面糖肽結(jié)合的受體,稱為E受體(CD2)。CD2 是一種糖蛋白,相對分子質(zhì)量為30 000~60 000,已證實E受體是人類T細(xì)胞所特有的表面標(biāo)志。當(dāng)T細(xì)胞與SRBC混合后,SRBC便粘附于T細(xì)胞表面,呈現(xiàn)花環(huán)狀。通過花環(huán)形成檢查T細(xì)胞的方法,稱為E花環(huán)形成試驗。根據(jù)花環(huán)形成的多少,可測知T細(xì)胞的數(shù)目,從而間接了解機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài),判斷疾病的預(yù)后,考核藥物療效等。

  實驗操作方法:

  1.用分層液密度梯度離心法分離淋巴細(xì)胞,計數(shù)后,用Hanks液配成107個/ml細(xì)胞懸液。

  2.取0.1 ml淋巴細(xì)胞懸液,加入0.1 ml 1% SRBC及0.05 ml滅活小牛血清,混勻。

  3.37℃靜置5分鐘,500 rpm低速離心5min后,放入冰箱,2小時或過夜。

  4.取出試管,吸棄上清液,加0.8%戊二醛溶液1 滴,輕輕旋轉(zhuǎn)混勻,置4℃冰箱固定15分鐘。

  5.取出后,輕輕旋轉(zhuǎn)試管,使沉淀細(xì)胞重新懸浮;取1滴涂片,自然干燥后,瑞氏染色,高倍下觀察。

  凡能結(jié)合3個SRBC者即為E花環(huán)陽性細(xì)胞。計數(shù)200個淋巴細(xì)胞,算出花環(huán)形成細(xì)胞百分率。

  實驗注意事項:

  1.SRBC最好是新鮮的,一般采血后保存在Alsever保存液中,2周內(nèi)可以用,超過2周SRBC與淋巴細(xì)胞的結(jié)合能力下降。

  2.從采血到測定,不得超過4小時,若用分離的淋巴細(xì)胞,放置時間也不得超過4小時,否則SRBC受體會自行脫落。同時用錐蟲藍(lán)檢查活力,活細(xì)胞不少于95%。

  3.計數(shù)前應(yīng)將沉于管底的細(xì)胞予以重懸,但只宜輕緩旋轉(zhuǎn)試管,使細(xì)胞團(tuán)塊松開即可,不能過猛或強(qiáng)力吹打,否則花環(huán)會消失或減少。

  4.要求全部試驗在室溫(16~23℃)中進(jìn)行。

  實驗材料:

  1.肝素抗凝血2 ml。

  2.聚蔗糖-泛影葡胺分層液。

  3.pH7.2~7.4 Hanks液。

  4.瑞氏染色液。

  5.0.8%戊二醛溶液(用Hanks液將戊二醛配成0.8%,然后用1 mol/L NaOH將pH調(diào)至7.2~7.4)。

  6.吸收滅活的小牛血清(小牛血清經(jīng)56℃ 30分鐘滅活后,取1體積壓積SRBC,加2體積滅活小牛血清,混勻后置37℃ 30分鐘,離心沉淀紅細(xì)胞,吸取上清,放4℃冰箱保存?zhèn)溆?。

  7.1% SRBC懸液(無菌脫纖維的綿羊靜脈血100 ml加Alsever保存液50 ml,置4℃冰箱保存,一般不宜超過2周。用前以Hanks液洗3次,1 500轉(zhuǎn)/分 10分鐘,棄上清,將壓積紅細(xì)胞用Hanks液配成1 %SRBC懸液,細(xì)胞濃度約為8×107個/ml)。

  E花環(huán)形成實驗臨床意義:

  E花環(huán)值增高

  見于甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺炎、重癥肌無力、慢性活動性或遷延性肝炎、sle活動期以及器官移植排斥反應(yīng)等。

  E花環(huán)值減低

  見于免疫缺陷性疾病,如惡性腫瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大面積燒傷、多發(fā)性神經(jīng)炎、淋巴增值性疾病。

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